供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 30次 |
货号: | ZY60811-30 |
CAS号: |
植物专用蛋白酶抑制剂混合液,100X
One-Stop SDS-PAGE Pack
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此我们公司开发了本产品。
产品特点:
1.一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
2.安全,将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3.灵活,分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE,满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4.使用改良的浓缩胶缓冲液,由于其含有染料,制备的浓缩胶呈蓝色,便于上样时识别加样孔。
5.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
产品组成:
储存条件:常温运输和保存,但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输,分别在4℃和-20℃有效期一年。
自备试剂:去离子水。
使用方法:
1.第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水,充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙烯酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2.第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对SDS-PAGE电泳,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1左右,因为此时PAGE胶的孔径最小,分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中(注意:甲叉双丙烯酰胺干粉有神经毒性,避免吸入粉末)。配好的30%AB溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。
3.根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度,参考下表:
注:如果上样体积少于10μL,可以不需要浓缩胶。
4.配制10%的APS(过硫酸铵):称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中,摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5.配制分离胶:在一个25mL的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%AB溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量,更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性,一定要戴手套操作。
6.配制浓缩胶(一般使用4%的浓度):在一个25mL的三角瓶中,先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量,丙烯酰胺溶液具有神经毒性,一定要戴手套操作。
7.将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀,抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应,不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
8.分别加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量,更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀。
9.先灌分离胶,在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候,停止灌胶。
10.由于分离胶比重较大,可以立即在上面灌浓缩胶,但灌注时必须小心,不要破坏分离胶和浓缩胶的液面,在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子,室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶,则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11.拔出梳子,用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉,将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液,用时再稀释成1×工作液。
13.在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液),100℃煮沸3~5分钟。短暂离心,取上清上样。
14.先用10 mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15.将电流增加到15 mA,直到染料进入分离胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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