供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 1600次 |
货号: | ZY600903-1600 |
CAS号: |
AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)
AFLP Kit(EcoRI-MseI)
本产品在传统AFLP-PCR的基础上经过精心优化而开发。AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合RFLP和PCR技术特点的、迄今为止最有效分子标记分型技术,其原理如下:
产品特点:
1.一站式,足够50次酶切-连接反应、50次预扩反应和1600次AFLP PCR(PCR按30μL体系计算),但不包括DNA 纯化和带型分析试剂(如PAGE电泳试剂和银染试剂)。
2.本系列产品提供EcoRI-MseI 组合,适用于GC含量在50%以上的基因组。对GC含量在50%以下的基因组,需从本公司采购AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3.各种参数都经过优化,一次PCR所得AFLP片段数一般在10-100之间,可重复性好,误差小于0.6%。
4.本产品适用于基因组在500 Mb-6000Mb的材料(如动物和植物),对于基因组在50-500Mb的材料(如细菌和真菌)或50Mb以下的材料(如质粒,cosmid,BAC,YAC和PAC等),需要分别另购专门的+1型预扩引物混合液和+3型EcoRI引物(8 种)AFLP引物对。
试剂盒组成:
+2型EcoRI引物和+3型MseI引物最后碱基的序列
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
自备试剂:Southern级DNA纯化试剂,尿素-PAGE电泳套装,银染试剂盒。
使用方法:
一、DNA提取(本试剂盒不提供相关试剂)
用户需要自备50-500ng Southern级别的基因组DNA,用前最好预实验以确保DNA能够被EcoRI和MseI内切酶彻底切开。
二、限制性酶切和接头连接反应(本试剂盒足够50次本反应)
1.在0.2mL离心管中加入设置20μL的限制性内切酶酶切体系:
2.轻柔混匀并短暂离心后,37℃保温2小时酶切(若PCR 仪器不带热盖,则必须加50μL自备石蜡油,否则水分会蒸发影响反应。下同),70℃保温15分钟灭活内切酶。
3.在上述酶反应体系中加入20μl EcoRI-MseI 接头混合物和1μl T4 DNA连接酶,轻柔混匀并短暂离心后,20℃保温2小时让接头跟DNA片段相连。
4.在一个离心管中加入10μl上步得到的连接反应液和90μL TE缓冲液,pH8,充分混匀,得到酶切-连接反应10倍稀释液,未用完的酶切-连接反应原液(30μL)可放-20℃保存。
三、预扩增(本试剂盒足够50次本反应)
5.在0.2mL离心管中设置30μl的PCR 体系:
6.离心数秒,按下列参数进行PCR预扩增:
7.可以取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖胶上电泳检测,产物为100-1500bp 模糊条带。
8.将剩下的预扩反应液用TE 稀释50倍,直接用于下步反应或放-20℃保存待用。
四、选择性PCR扩增(本试剂盒足够至少1600次本反应)
9.在0.2mL PCR 管中,加入下列成分(如果用户已经知道哪个一种或几种引物组合适合自己的材料,则直接使用;如果不知道,则需要预先测试所有64 种组合,设置64个PCR反应),下面只是一种组合:
10.轻柔混匀后离心数秒,按下列参数进行PCR:
五、尿素-PAGE电泳和银染(需另购试剂并按相关说明书进行)
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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