供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 1,000U |
货号: | ZY-6015A |
CAS号: |
UNG (Uracil N-Glycosylase)
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) | 说明书 |
ZY-6015A | UNG (Uracil N-Glycosylase) | 1,000U | 600 | |
ZY-6015B | 5,000U | 2,000 | ||
ZY-6303 | dNTP/dUTP Mixture | 1 ml | 400 |
尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 为来源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白,分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,但对RNA无活性。 UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染,作用原理基为:如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。 | ||
组分 | ||
组分名称数量Uracil N-Glycosylase (5 U/μl)200 μl/1 ml | ||
应用 | ||
| ||
活性定义 | ||
在标准PCR反应体系下,37℃条件下,1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。 | ||
活性测试 | ||
取1μg dUTP PCR产物,用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2-7:分别为 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR产物;M:D2000 DNA Marker。 | ||
性能测试 | ||
UNG在标准PCR体系下(50ul体系)性能测试。 处理方法为:在反应体系中分别加入不同量的UNG(如图所示),50度2min,95度5min,然后进入PCR循环扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。Lane 1-3:标准dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;M:D10000 DNA Marker。 | ||
反应buffer | ||
Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。 | ||
酶保存液 | ||
20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 | ||
储存 | ||
-20℃可保存2年,避免反复冻融。 | ||
热失活 | ||
95℃,5min。 | ||
取1μg dUTP PCR产物进行UNG热失活测试。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min;Lane 3: 1U UNG酶95度加热5min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min); Lane 4: 1U UNG酶95度加热10min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min);M: D2000 DNA Marker。 |
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