供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100ml |
货号: | ZY-6105 |
CAS号: |
Western及IP细胞裂解液
产品简介:
1. Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
2. Western及IP细胞裂解液的主要成分为EDTA 以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
3. 用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞,去除培养液用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。轻轻的摇晃约5-10分钟。充分裂解后,10000-14000g离心10分钟,取上清,即可进行后续操作。
裂解液用量说明: 用于不同规格标准培养板裂解液容量
板规格/表面积
试剂容量
100mm
500-1000μι
60mm
250-500μι
6-well plate
200-400μιper well
24-well plate
100-200μιper well
96-well plate
50-100μιper well
3. 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹或旋涡震荡5-10分钟以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心10分钟,取上清,即可进行后续操作。
对于组织样品:
1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,以清洁表面的血迹,将组织称量后切成几个较小的组织块放入组织匀浆器中。
2. 取适当量的Western及IP细胞裂解液混匀,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按组织净重(g):裂解液(ml)=1:10的比例,加入相应体积的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液 如果需要高浓度的蛋白样品 可以适当减少裂解液的用量) 。
4. 用玻璃匀浆器匀浆直至充分裂解。
5. 充分裂解后10000-14000g离心3- 5分钟取上清即可进行后续作。
注意事项:
1. 抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。建议将样品分装成合适的量,然后冷冻干燥或直接以液体状态置-20℃中保存,不要反复冻融。
2. 需自备PMSF。建议在临用前数分钟内加入PMSF使PMSF的最终浓度为1mM。PMSF(WB0114)可以向我公司订购。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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