供货周期: | 现货 |
品牌: | 泽叶生物 |
规格: | 100 mL |
货号: | ZY-64L014 |
CAS号: |
EZ ECL plus化学发光液(增强型)
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
EZ ECL 增强型化学发光液 | ZY-64L014 | 100 mL | 300 |
EZ ECL 增强型化学发光液 | ZY-64L015 | 500 mL | 1200 |
产品描述
本产品用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,可使用更高的抗体稀释倍数(1:2000~1:10000),极其节省抗体, 可检测低于皮克级的蛋白,操作步骤无需进行特别优化。灵敏度高,信号持续时间长达5小时,不但适用于X射线胶片、也可用CCD或激光成像仪成像。
产品组分
组分名称 | A液 | B液 |
AP34L014(100 mL) | 50 mL | 50 mL |
AP34L015(500 mL) | 250 mL | 250 mL |
保存方法
常温运输,4℃避光干燥保存,保质期1年。
使用方法
1. 执行常规SDS-PAGE、转膜、洗膜。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
【注】:推荐将一抗浓度稀释到0.5 μg/mL(0.05~1 μg/mL均可), 将二抗浓度稀释到0.02 μg/mL(0.005~0.04 μg/mL均可)。
2. 最后1次洗膜的同时,新鲜配制发光工作液,根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀,备用。
【注】:(1)短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液,但为获得最佳结果,将此工作液保存在棕色瓶中,避免暴露于任何强光。(2)取A液和B液一定要用不同的枪头,工作液现配现用,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液(勿使膜完全干燥)。用移液器将工作液加到膜上(推荐1 cm2膜加150 μL发光液),使之充分接触。室温孵育5 min,准备立即压片曝光。
4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可使膜完全干燥。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
6. 在黑暗中将X感光胶片放置在包裹的保鲜膜上,根据蛋白浓度曝光适当时间(根据光强度需摸索曝光时间,一般30s-2min),显影冲洗。
【注】:根据经验,如果背景过高,可使用两张X感光胶片同时压片。
注意事项
1. 步骤1~5可在日光灯下操作,但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可以避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系,曝光不足则条带模糊。
3. 发光工作液孵育约3 min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1~10 h。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
4. 由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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