植物RNA的提取方法与步骤!
首次使用要加试剂:RNA wash buffer II 加48ml无水乙醇;RB buffer 每毫升加20μL2-mercaptoethanol (硫基乙醇)。
试剂使用顺序:RB—RWF wash Buffer –RNA wash Buffer II---DEPC/ddH2O2(65℃预热);提前开水浴锅65℃
1、100mg植物材料液氮研磨,加入到1.5ml 离心管;
2、迅速加入500μL RB buffer,旋涡震荡至完全悬浮;
3、吸取液体过柱(gDNA 蓝),室温离心14000r,5min;(去除gDNA)
4、加入0.5倍体积的无水乙醇(约250μL)于过柱液体,吸打混匀;
5、吸取700μL过柱(RNA橙色),室温离心12000r,1min;
6、弃掉滤液,将剩余液体加入吸附柱,12000r,1min; (可重复步骤5.6过柱一次 吸附RNA)
7、加入400μL RWF,10000r离心1min;
8、弃掉废液,加入500μL wash buffer II,10000 r离心30s;
9、弃掉废液,加入500μL wash buffer II,10000 r离心30s;
10、换新管,12000r空离2min;室温晾干(滤膜干了就行,不能太久,过干难洗脱),去除乙醇
11、将过滤柱转移至新1.5ml离心管,加入65℃预热的DEPC/ ddH2O2水50-100ul (分2次加,每次25ul洗脱RNA);,室温2min;10000r离心2min
12、琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,分光光度计检测浓度及OD值;RNA储存在-80℃。
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