原代小鼠心肌成纤维细胞分离培养方法!
小鼠心肌成纤维细胞的组织来源于实验动物的正常心脏组织,心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官,主要功能是提供压力,把血液运行至身体各个部分。心脏的作用是推动血液流动,向器官、组织提供充足的血流量,以供应氧和各种营养物质,并带走代谢的终产物(如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等),使细胞维持正常的代谢和功能。
心脏中,心肌成纤维细胞约占正常心肌组织细胞总数的60%-70%,是心脏中非心肌细胞的主要组成部分,广泛存在于心脏组织中,包围心肌细胞,连接心肌细胞间质,与缺血性心脏病、炎症、肥大、梗死等病理状态密切相关。细胞生长方式以长梭状细胞,贴壁培养。
小鼠心肌成纤维细胞的方法有很多,小编今天提供的心肌成纤维细胞分离方法有两种,一种是贴块法,一种是消化法,这两种方法都可以用于分离和培养原代细胞。
一、实验器械
1.培养皿
2.T-25细胞培养瓶
3.100目不锈钢网筛
4.200目不锈钢网筛
5.眼科剪
6.眼科镊
7.离心管(15ml、50ml)
二、实验分离和培养步骤
1. 小鼠颈椎脱臼处死后,剃除腹胸部的被毛,放入装有75%酒精的烧杯中浸泡5min。
2. 取出小鼠,在无菌环境下打开胸腔,取出心脏组织,注入盛有无菌1×PBS的培养皿中,洗净组织表面的血液。
3. 将清洗干净的心脏组织转入装有75%酒精的培养皿中浸泡15s以杀死大多数的心脏被膜细胞,浸泡完成后立即转入装有无菌1×PBS的培养皿中震荡清洗。
4. 清洗完成后,用剪刀镊子配合除去主动脉弓和心房组织,仅保留心室部分,再次用1×PBS清洗去除心室内的血液。
5. 将清洗干净的心室组织用剪刀减成1mm3大小左右的碎块,之后用PBS清洗若干次后按下述两种方法之一进行后续操作。
A.贴块法
6. 将清洗好的碎块转入另一培养皿中,用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡组织,室温消化3-5min。
7. 消化完成后,添加数毫升FBS终止消化,之后吸弃液体,加PBS清洗组织块1次后,用200ul吸头将组织块平均接种于T-25培养瓶的培养面上,之后将培养瓶放置于37℃二氧化碳培养箱中,静置2-4h。
8. 待组织处于略微脱水的状态时,小心添加2ml完全培养基,添加时注意尽量不要将组织块冲起,要使培养基接触所有的组织块。
9. 之后放入培养箱中继续培养,一般2-4天后成纤维细胞会从组织块周围爬出,待爬出的细胞有较多数量时,可将细胞消化下来,去除组织块,转入另一培养瓶中培养。
B.消化法
6. 将清洗好的碎块转入另一离心管中,加入混合消化液(0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型胶原酶)37℃水浴消化8min后,吸取上层混悬液弃去。
7. 余下组织加入混合消化液10ml,37℃水浴震荡消化10min;吸取上层悬液至另一离心管中,加入适量FBS终止反应;剩余沉淀物再加消化液消化3-5次,直至组织块完全消化。
8. 按1∶1加入含血清的培养基,中止酶反应,悬液过150目网筛去除较大的组织块。
9. 收集全部中止后的消化液于离心管中,300g,离心10 min,弃去上清,加入培养液重悬细胞后计活细胞数。
10. 调整细胞密度以1× 106个/ml 接种入的T-25培养瓶中,每瓶添加2ml细胞悬液。
11. 培养瓶放置于37℃,5% CO2培养箱中静置40min后,吸弃上清液以去除未贴壁的非成纤维细胞和死细胞,再添加5ml完全培养基继续培养。
除了上述的细胞分离方法以外,百欧博伟生物还有很多关于其他细胞的分离方法,想要学习的小伙伴可以来百欧博伟生物进行现场学习,如果想要其他原代分离培养方法,可在购买相应的细胞过程中,赠送该细胞的分离方法及培养条件,想要了解更多,打电话或咨询相关工作人员。中国微生物菌种查询网
H-EMC-SS人软骨肉瘤细胞的处理方法与培养步骤!
ATCC 25557死亡梭杆菌的特点与优势及微生物培养方法!
人保寿险细胞免疫疗法医疗保险首例赔付圆满成功!
高职学生盲赠造血干细胞:为别人带去希望,值得!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Parabacteroides merdae
Paraburkholderia aromaticivorans
Paraburkholderia caledonica
Paraburkholderia eburnea
Paraburkholderia flava
Paraburkholderia fungorum
Paraburkholderia ginsengiterrae
Paraburkholderia graminis
Paraburkholderia monticola
Paraburkholderia panaciterrae
Xanthobacter agilis
Thermochromatium tepidum
Planctopirus limnophila
关注
拨打电话
留言咨询