细胞培养板的选择和使用方法!
一、细胞培养板
细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具,形状、规格、用途多样。
你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫?
你是否正为如何方便、正确使用培养板而苦恼?
你对如何处理培养板是否也有困惑?
对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会?
二、细胞培养板的选择
1)细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);
2)培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;
3)根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。
三、平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择
1)贴壁细胞一般用平底培养板。
2)悬浮型细胞的培养一般用V型。
3)U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。
4)V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。
四、不同型状的板子自然有不同用途
平底的什么类型的细胞都可用,但当细胞数目较少,如做克隆时,就用96孔平底板。
另外,做MTT等实验时,无论贴壁和悬浮细胞,一般均用平底板。
至于U或V型板,一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面,当做两种不同淋巴细胞混合培养时,需要二者相互接触以刺激。因此,一般需要U型板﹐因细胞会由于重力的作用而聚集在一个很小的范围內,V型板的用途更少,一般用于细胞杀伤实验时,为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种实验也可用U型板替代(加入细胞后﹐低速离心)。
如果是养细胞的话, 通常是运用平底的, 另外要特別注意材质, 标示"Tissue Culture (TC) Treated"就是养细胞用的。
圆底的通常是拿来做分析, 化学反应, 或是保存样品用。因为圆底比较好将液体吸得干净, 如果用平底的就不好吸了。 不过, 如果你是要测吸光值的话, 一定要买平底的才行。
大部分细胞培养都用平底培养板,便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致,还便于MTT检测。
圆底培养板主要用于同位素掺入的实验,需要用细胞收集仪收集细胞的培养,如“混合淋巴细胞培养”等。
如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子
(一)操作步骤
1、加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。
2、加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
3、温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。
4、洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。
5、加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。
6、显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。
(二)结果判定
1、酶标仪设定波长450nm,先用空白调零,然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定,不必设置空白对照孔。
2、当阴性对照平均OD值小于0.08,阳性对照(pc)OD值大于0.30时,说明试剂盒有效且实验操作正确,否则应当重复试验。
3、临界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时,按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。
4、标本OD值≤临界值为阴性,标本OD值>临界值为阳性。
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量:不同孔板所加培养液的液面都不宜太深,一般在2-3mm范围,结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换,而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
IM-9 (人外周血B淋巴细胞)的转化方法与实验步骤!
帕氏食氢产水菌的形态特征与实验内容及使用范围!
ATCC 27340 延长布劳特氏菌的培养方法与操作步骤!
免疫细胞临床与免疫细胞疗法:未来医学的新方法!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Hymenobacter fastidiosus
Conexibacter woesei
Conchiformibius steedae
Conchiformibius kuhniae
Companilactobacillus zhongbaensis
Companilactobacillus versmoldensis
Companilactobacillus tucceti
Companilactobacillus suantsaicola
Companilactobacillus paralimentarius
Companilactobacillus pabuli
Desulfobacter hydrogenophilus
Desulfobacter latus
Desulfobacterium autotrophicum
关注
拨打电话
留言咨询