大肠埃希氏菌初步生化试验与鉴定方法!
大肠埃希氏菌初步生化试验与鉴定方法
一、初步生化试验
在CT-SMAC 和改良CHROMagar O157 显色琼脂平板上挑取5 个~10 个典
型或可疑菌落,分别接种TSI 琼脂,同时接种MUG-LST 肉汤,并用已知MUG阳性的大肠埃希氏菌株做对照,于36℃±1℃培养18h~24h。必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色。在TSI 琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。置MUG-LST 肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,大肠埃希氏O157:H7/NM 无荧光;对分解乳糖且无荧光的菌株,在营养琼脂平板上分纯,于36℃±1℃培养18h~24h,并进行下列鉴定。
二、鉴定
⒈血清学试验
在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落,用O157:H7 标准血清或O157 乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于H7 因子血清不凝集者,应穿刺接种半固体琼脂,检查动力,经连续传代3 次,动力试验阴性,H7 因子血清凝集阴性者,确定为无动力株。
⒉生化试验
用API20E 生化鉴定试剂盒或VITEK-GNI+检测卡,按照生产商提供的使用
说明进行。大肠埃希氏菌O157:H7/NM 生化反应特征见表。
⒊生化试验 特征反应
三糖铁琼脂 底层及斜面呈黄色,H2S 阴性
山梨醇 阴性或迟缓发酵
靛基质 阳性
MR-VP MR 阳性,VP 阴性
氧化酶 阴性
西蒙氏柠檬酸盐 阴性
赖氨酸脱羧酶 阳性(紫色)
鸟氨酸脱羧酶 阳性(紫色)
纤维二糖发酵 阴性
棉子糖发酵 阳性
MUG 试验 阴性(无荧光)
动力试验 有动力或无动力
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