菌种的保藏方式有哪些?
营养体菌丝体保藏的菌种,营养生长不能很旺盛,生长速度不能非常快,培养基营养成分丰富,温度较高,生长速度快的菌种,衰老速度也快,衰老的菌丝作菌种保藏时,保藏后菌丝复活程度较差,生长势也不好,菌种容易退化。营养体保藏的菌种,培养基营养成分应略贫乏,含水量和培养温度应稍低些,这样,菌丝生长速度较慢,生长势也不会太旺盛,菌丝衰老速度也慢。今天小编主要为大家介绍几种菌种的保藏方式。
1、斜面菌种低温保藏
培养基:一般菌种用PDA培养基。葡萄糖18g,马铃薯(去皮)200g ,琼脂20g ,水1000ml,PH自然。特殊菌种用特殊培养基。
接种:接种保藏菌种用的菌种,菌丝应健壮。用前端的菌丝作接种材料。接种时要防止火焰高温、消毒药液对菌种的伤害。
培养:应以适宜温度或略低于最快生长温度的温度培养。蘑菇、香菇菌种应在22度左右温度培养,灵芝等高温菌种应在25度左右温度培养,培养时试管表面用8层厚的纱布或薄棉被覆盖,避光。
保藏菌种质量要求:菌丝生长整齐,菌丝长到培养基面积2/3时。
保藏方法:用牛皮纸或硫酸纸将试管棉花塞包好,放在清洁的小木盒中。木盒上注明菌种的名称、菌名、保存日期、经手人姓名,再放在4度中保藏。保藏菌种的冰箱不要经常开启,保持温度稳定。
2、斜面菌种液体石蜡油保藏
石蜡没保藏是用灭菌并除去水分的液体石蜡油灌入母种试管中,使菌体与空气隔绝,以降低其生命活动水平,并阻止水分散失的方法来保藏。石蜡油保藏,油层下氧含量低,菌丝呼吸水平极低,培养基营养消耗速度极慢,菌种不易老化、退化,可较长时间保藏。
石蜡油保存分石蜡油灭菌、脱水处理、灌石蜡油、封口等几个步骤。
3、基质培养基菌种的保藏
基质培养基保存是用原种、生产种的培养基保存菌种。基质培养中有丰富的迟效性养分,菌丝会分解培养基中复杂养分边利用生长。
培养基本方与正常原种相同,但培养料应稍坚实。培养料的含水量应比生产用培养料含水量低2%左右。培养基较坚实,含水量较低,可降低菌丝生长速率,降低培养基中空气含量、降低呼吸强度,从而延缓衰老。
4、蒸馏水保存
蒸馏水保存菌种的原理目前还不清楚,可能是食用菌菌丝细胞壁较坚牢,游离水不能大量进入菌丝细胞内;蒸馏水中无营养成分,因此菌丝新陈代谢极慢,从而延缓衰老。
蒸馏水也可用斜面菌种保存。保藏时,在超净台中,用接种钩、接种铲将斜面菌种切割成米粒大小,然后把米粒大小的斜面菌种称许在蒸馏水保藏管中,每管放7--8粒菌种,其余操作方法和液体菌球相同保藏。
5、液氮超低温保存
液氮内的温度为-196度,在-136度——-196度下,食药用菌菌丝生长、呼吸、新陈代谢处于完全停止状态,菌丝不会衰老,从而能使菌种保存很长时间而不退化。液氮超低温保藏菌种,需要有液氮罐、菌种保存管和保存液。常用PDA培养基菌种或麦粒培养菌种。保存容器可用冻存管或安瓿管。保种程序:(1)培养菌种(2)菌种中加入保存液(3)预冷(4)放入液氮罐
6、营养液保藏法
营养液配制:马铃薯汗约900ml,葡萄糖16g,磷酸二氢钾0.3g,硫酸镁0.15g,z后补加蒸馏水使总容积到1000ml。每一12mm×16mm的试管中灌入营养液5ml,用棉塞塞管口,在111kPa蒸汽压下灭菌40分钟。冷却后,在超净台中移入待保存的菌种,菌种在移入前,先用接种钩将其分割成绿豆粒大小,每管移入7--8粒,同时用灭菌过的软木塞或橡皮塞更换棉塞,然后放入4度左右冰箱中保存。保存期间菌丝还会微量生长,可在液面形成菌膜,并向管壁上方生长,一般可保存2--3年。
7、生理盐水保藏法
先在试管中加入生理盐水,用棉塞塞住管口,在152kPa蒸汽压下灭菌40分种。冷却后,在无菌箱中,将斜面菌种切割成绿豆粒大小,并移置灭过菌的生理盐水管中,每管放7--8粒。菌种放入生理盐水管中,每管放7--8粒。菌种放入生理盐水管中后,用灭过菌的软木塞或橡皮塞塞好管口,再放入4度左右冰箱中。该法可保存1年左右。
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