肝内胆管上皮细胞的背景与应用!
一、背景
肝内胆管上皮细胞(HIBEpiC)提取于人肝脏组织,于原代末期冻存。每管含有细胞数>5×105 cells/ml,此细胞通过Cytokeratin-18,-19 and Vimentin免疫荧光染色验证,经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。细胞可以达到15倍增。
肝内胆管上皮细胞排列成肝内胆管树,在肝脏中形成不同直径的三维管道网。它们仅由3-5%的肝脏细胞组成,但每天产生的胆汁能多达总量的40%。大量研究表明,肝内胆管上皮细胞通过控制激素调控的分泌和吸收,在保持、调整和扩大胆小管的结构中发挥重要作用。肝内胆管上皮细胞在先天性和获得性免疫应答方面起着积极作用。比如:肝内胆管上皮细胞分泌趋化因子和细胞因子,通过表达重要的细胞粘附分子使免疫反应局部化。一般情况下,肝内胆管上皮细胞通过有丝分裂增值。然而,在某些条件下,肝内胆管上皮细胞会明显增生。
内皮细胞发挥多种生理功能,并且是许多病理过程的核心。肝脏包含两种截然不同的内皮细胞类型:血管和正弦波。正弦血管内皮细胞(SEC)是微血管内皮细胞,具有独特的表型,让人联想到树突状细胞,并具有独特的CD4+T细胞抗原呈递功能。因此,SEC代表了一种新型的器官驻留“非专业”抗原呈递细胞,似乎参与了肝脏免疫应答的局部控制和免疫耐受的诱导。
二、应用
用于TLR4通路诱导上皮间质转化在原发性胆汁性肝硬化中的作用研究:
原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一种以肝内胆管上皮细胞损伤为主要特征的慢性、自身免疫性、胆汁淤积性肝病。该病以中老年女性多发,病因和发病机制尚不完全清楚。大量证据表明,PBC是以遗传为基础,由遗传和环境相互作用而产生的。一些临床和流行病学研究提示,泌尿道感染等因素可能与PBC的发病密切相关,是PBC发病的危险因素,但现有的研究结果并不完全一致,甚至个别研究的结果截然相反。
PBC患者肝内胆管上皮细胞(intrahepatic biliary epithelialcells,IBECs)TLR4表达明显上调,可能参与PBC的发病。泌尿道感染主要是革兰阴性细菌,其主要成分为脂多糖(LPS)。因此,我们有理由推测,LPS-TLR4通路在PBC向肝硬化、肝癌发展过程中具有重要作用。
TLR4通路对肝内胆管上皮细胞EMT的作用机制为进一步阐明TLR4通路异常活化在PBC进展过程中作用机制,体外培养肝内胆管上皮细胞,利用刮痕实验、趋化实验、细胞免疫化学、实时荧光定量PCR、MyD88及Snail小干扰RNA、抑制剂阻断、Western blot、萤光素酶报告等实验方法深入探讨LPS-TLR4信号通路活化对肝内胆管上皮细胞EMT的诱导作用及其具体分子机制。
结果显示10ug/ml LPS刺激肝内胆管上皮细胞24小时后,细胞迁移明显高于对照组,经过Transwell小室迁移的细胞数为110.4±9.17,明显高于对照组(75.8±7.78),差异均有统计学意义(P<0.01)。
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