DMEM低糖(含双抗)的注意事项和使用步骤!
一、背景及概述
DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量,同时又分为高糖型(低于4500mg/L)和低糖型(低于1000mg/L)。DMEM低糖(含双抗)内葡萄糖含量为1100毫克/升,高糖DMEM其内含量为4500毫克/升。DMEM低糖(含双抗)用于养干细胞可防分化,高糖DMEM可以养大多数哺乳动物的细胞,包括你养的卵巢上皮细胞。
二、注意事项
1、培养基长期放置,需要2-8℃避光保存,请勿低温冻存。
2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解,长期放置后使用若发现细胞生长变慢可在使用前加入适量的L-谷氨酰胺,来维持细胞的正常代谢。
3、含有NaHCO3的培养基开瓶次数较多后,培养基内的CO2会逐渐溢出,PH值上升,培养基的颜色会偏紫色。培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡,建议分装成小瓶使用或用HEPES调至正常PH范围。
三、DMEM低糖(含双抗)使用步骤
一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。
二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。
三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用DMEM低糖(含双抗)纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。
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