BEL-7402人肝癌细胞的背景与应用!
一、背景
BEL-7402人肝癌细胞是于1974年从临床肝癌手术标本中建立的;BEL-7402细胞群体倍增时间为20小时,移植到处理过的Wistar大鼠中的能形成肿瘤结节,BEL-7402细胞形态呈上皮样细胞。
在电子显微镜下,BEL-7402细胞亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维,与临床肝癌细胞相似。BEL-7402细胞分瓶培养第四天时,其有丝分裂指数约为7%。BEL-7402细胞的染色体数为不足三倍体,有一个异常的近端着丝点染色体。间接免疫荧光法测BEL-7402细胞内的AFP为阳性反应;LDH同工酶谱显示,BEL-7402细胞与成年人肝细胞不同,而与人胚肝及临床肝癌相近。
细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
二、应用
用于姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中环氧合酶-2表达影响的研究:
探讨姜黄素(curcumin,Cur)对人肝癌细胞BEL-7402中环氧合酶(cyclooxygenase,COX)-2表达的影响。
方法:1、以不同浓度的姜黄素(0μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L)处理人肝癌细胞BEL-7402,CCK-8法分析细胞增殖,采用RT-PCR和western blot方法检测人肝癌细胞BEL-7402中COX-2的表达。
2、以10μmol/L姜黄素、特异性COX-2抑制剂NS-398200μmol/L+10μmol/L姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402,RT-PCR和western blot检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA、蛋白表达。
结果:1、不同剂量的姜黄素(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L)对肝癌细胞增殖率的影响与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P<0.01);
2、随着姜黄素浓度的增加,COX-2mRNA表达逐渐降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P<0.01);
3、随着姜黄素浓度的增加,COX-2蛋白表达逐渐降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P<0.01);
4、姜黄素10μmol/L组、NS-398200μmol/L组+姜黄素10μmol/L组与对照组相比,VEGFmRNA、VEGF蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.01),NS-398200μmol/L组+姜黄素10μmol/L组与姜黄素10μmol/L组相比,VEGF mRNA、VEGF蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。
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