人胚肺细胞的培养与处理方法!
MRC-5细胞来自14周龄男性胎儿的正常肺组织;MRC-5细胞老化前能传代42-46次群体倍增。MRC-5细胞是正常二倍体细胞系,46条染色体、XY核型。模式染色体数为46,概率为70%。
一、细胞简介
规格:5×10⁵cells/T25培养瓶
拉丁属名:MRC-5
细胞名称:MRC-5(人胚肺细胞)
种属:人
年龄(性别):男;14周龄
组织来源:肺
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
生长培养基:MEM(货号:PM150410)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120)
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
二、收到常温细胞后的处理方法
1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与中国微生物菌种查询网的技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
2、用 75 酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养 2-4 小时,以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过 80 ,可正常传代;若未超过 80 ,移除细胞培养瓶内培养基,预留 5ml 左右继续培养,直至细胞密度达 80 左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至 50ml 无菌离心管内,1200rpm 离心 5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入 5ml 培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过 80 ,可将细胞悬液分至 2 个细胞培养瓶内培养,补加培养基至 5ml;若细胞密度未超过 80 ,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达 80 左右时再进行传代操作。
三、MRC-5(人胚肺细胞)的复苏
1、把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3、把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
4、标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
5、3天换一次培养基。
四、 MRC-5(人胚肺细胞)的传代
1、培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2、把原有培养基吸掉。
3、加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
4、细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。
5、用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
6、把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
7、倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。
8、根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。
五、 MRC-5(人胚肺细胞)的冻存
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制:70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。
要注意的就是无菌操作!
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