三糖铁琼脂培养基的试验方法与应用!
三糖铁(TSI)琼脂培养基中乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,培养基中葡萄糖含量少,乳糖和蔗糖多。由于对糖的利用不同,不同细菌在底层产酸、斜面产酸、产生硫化氢和产气上有不同表现。这三种糖中,由于葡萄糖的阻碍作用,细菌首先利用葡萄糖(如大肠埃希氏菌在含葡萄糖和乳糖时,葡萄糖阻遏大肠埃希氏菌乳糖分解酶系的合成,葡萄糖耗尽后,中间有一个延滞期,再利用乳糖)。底层产酸变成黄色,表明能发酵葡萄糖。斜面产酸表明至少能有氧利用乳糖和蔗糖中的一种。
只能利用葡萄糖的细菌,在斜面上进行有氧呼吸,培养基中少量葡萄糖被彻底氧化变成二氧化碳和水,不足以改变指示剂的颜色。或者细菌利用蛋白胨中的氨基酸脱羧作用,产生碱性物质使斜面变碱,红色加深。底部由于是在厌氧状态下,氧化一还原电位适合发酵产酸,酸类不被氧化,即使是发酵少量葡萄糖,也能使指示剂改变颜色。而假单胞菌、产碱菌等专性需氧菌因缺氧在底层不产酸表现为红色。因培养基中可能有微量硝酸盐,有的专性需氧菌进行硝酸盐呼吸,微弱产酸变为橘黄色,但不能根本上改变颜色显黄色。
而发酵乳糖或蔗糖的细菌,则产生大量的酸,使整个培养基指示剂的颜色改变,呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐(Fe2十)和硫代硫酸盐反应,生成黑色的硫化亚铁沉淀。
不同细菌可发酵不同的糖,如肠杆菌科的志贺氏菌都能分解葡萄糖,产酸不产气,大多不发酵乳糖,不产生HZS,在TSI选择培养基上无黑色沉淀,斜面变红,底部仍保持黄色。
而沙门氏菌可发酵葡萄糖,但不能发酵乳糖,产生H,S,所以在TSI选择培养基上有黑色沉淀,斜面变红,底部仍保持黄色。大肠埃希菌则可发酵葡萄糖和乳糖,产酸产气,且不产生H,S,在TSI选择培养基上无黑色沉淀,斜面变黄,底部保持黄色。故可利用此试验鉴别肠杆菌科的这些细菌。
培养基:三糖铁琼脂培养基。
试验方法:以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物,先穿刺接种到TSI深层,距管底3-5mm为止,再从原路退回,在斜面上自下而上划线,置(36±1)℃培养18一24h,观察结果。
结果:产生黑色沉淀即表明产生了HZS;发酵乳糖或蔗糖的细菌使整个培养基呈现黄色;只能利用葡萄糖的细菌则斜面变红,底部仍保持黄色。
应用:本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用产酸产气和硫化氢(变黑)的产生情况。
革兰氏阴性菌在三糖铁上的反应如下:肠道杆菌科和弧菌科底层产酸,变为透明黄色,斜面产酸或产碱。非发酵型革兰氏阴性菌斜面产碱或不变,底层产碱或不变或微产酸变成橘黄色。
若单纯检验硫化氢产生情况,用醋酸铅纸条法比三糖铁法更为敏感。有的菌或菌株在三糖铁上硫化氢阴性,但用醋酸铅试纸条时表现为硫化氢阳性,如空肠弯曲菌。
三糖铁(TSI)琼脂培养基反应模式是许多杆菌鉴定表的组成部分.也可作为观察其他培养基反应的有价值的质控依据。
克氏双糖铁(KIA)培养基中含葡萄糖和乳糖,反应原理和三糖铁(TSI)琼脂培养基相同,在肠杆菌科的细菌鉴定中经常使用。
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