小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法!
细胞简介
平台编号:bio-54191
提供形式:复苏状态
拉丁属名:D3
细胞名称:D3;小鼠胚胎干细胞D3
中文名称:小鼠胚胎干细胞D3
描述:小鼠全能性胚胎干细胞,每支细胞量1×106
动物种别:小鼠,129/Sv+c/+p品系
组织来源:小鼠囊胚内细胞团
形态:球形克隆
培养基和添加剂:mES完全培养液配方(600 ml): DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES级FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl(终浓度为1000U/ml) β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。
温度:37摄氏度。
供应限制:仅供研究之用。
REFERENCE:Doetschman TC, et al. The in vitro development of blastocyst-derived embryonic stem cell lines: formation of visceral yolk sac, blood islands and myocardium. J. Embryol. Exp. Morphol. 87: 27-45, 1985. PubMed: 3897439 Williams RL, et al. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature 336: 684-687, 1988. PubMed: 3143916 Gossler A, et al. Transgenesis by means of blastocyst-derived embryonic stem cell lines. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 9065-9069, 1986. PubMed: 3024164 Doetschman T, et al. Targeted mutation of the Hprt gene in mouse embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 8583-8587, 1988. PubMed: 3186749 Chambon P, et al. Genetically engineered mice containing alterations in the genes encoding retinoic acid receptor proteins. US Patent 6,486,381 dated Nov 26 2002
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
细胞的运输保存
采用干冰保存运输。收到细胞时,若干冰已经完全融化,请立即将细胞复苏培养;若尚留有干冰,请立即将细胞放入液氮中保存待用,请按指定条件贮存细胞,切不可将细胞置于高温环境。
小鼠胚胎干细胞D3的一般培养方法
1、组织块培养法
A)按照前述方法取材,将组织剪成或切成1mm3大小的小块,并加入少许培养基使组织湿润。
B)将小块均匀涂布于瓶壁,每小块间距0.2 cm~12.5px,一般在25mL培养瓶(底面积为437.5px2)可接种20~30小块为宜,小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。
C)培养2~4小时,待小块贴附后,将培养瓶缓慢翻转平放,静置培养,动作要轻,严禁摇动和来回振荡,以防D3小鼠胚胎干细胞由于冲动而使小块漂起而造成培养失败,若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多,以保持组织块湿润即可,培养24小时后再补液,培养初期移动和观察时要轻 拿轻放,开始几天尽量不去搬动,以利贴壁和生长,培养3~5天时可换液,一方面补充营养,一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。
2、消化培养法
该方法是采用前述的消化分散法,将妨碍细胞生长的细胞间质(包括基质、纤维等)去除,使细胞分散形成细胞悬液,然后分瓶培养。
3、悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
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