人淋巴母细胞的背景应用!
一、背景
人淋巴母细胞是处于增殖状态的淋巴细胞,其体积增大,RNA和蛋白质合成率增高,受抗原刺激后,可发生活化、增殖和分化成淋巴细胞。
淋巴细胞(lymphocyte)是白细胞的一种,是体积最小的白细胞。其由淋巴器官产生,主要存在于淋巴管中循环的淋巴液中,是机体免疫应答功能的重要细胞成分,是淋巴系统几乎全部免疫功能的主要执行者,是对抗外界感染和监控体内细胞变异的一线“士兵”。
淋巴细胞是一类具有免疫识别功能的细胞系,按其发生迁移、表面分子和功能的不同,可分为T淋巴细胞(又名T细胞)、B淋巴细胞(又名B细胞)和自然杀伤(NK)细胞。T细胞和B细胞都是抗原特异性淋巴细胞,它们的最初来源是相同的,都来自造血组织。
淋巴细胞是免疫反应的核心。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志和免疫功能等方面的不同,可分为T细胞、B细胞和NK细胞三类。
T淋巴细胞随血循环到胸腺,在胸腺激素等的作用下成熟,而B细胞在骨髓中分化成熟。
当受抗原刺激后,T淋巴细胞即转化为淋巴母细胞,再分化为致敏T淋巴细胞,参与细胞免疫,其免疫功能主要是抗胞内感染、瘤细胞与异体细胞等;而B淋巴细胞是先转化为浆母细胞,再分化为浆细胞,产生并分泌免疫球蛋白(抗体),参与体液免疫,其功能是产生抗体,提呈抗原,以及分泌细胞内因子参与免疫调节;NK细胞不依赖抗原刺激而自发地发挥细胞毒效应,具有杀伤靶细胞的作用。
二、应用
用于EB病毒转化淋巴母细胞中相关基因表达的检测与分析研究:
研究EB病毒诱导淋巴细胞转化的分子机制提供实验依据。
方法:从5例健康成人外周静脉血中分离出淋巴细胞,在体外利用EBV诱导B淋巴细胞转化建立永生化的淋巴母细胞系。提取转化淋巴母细胞及其配对的健康人淋巴细胞的总RNA和总蛋白,应用实时定量PCR和Western blot方法,分别检测E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例转化淋巴母细胞及其匹配的健康人淋巴细胞中的表达情况。
结果:成功建立EBV转化的淋巴母细胞系,得到了5例健康人转化淋巴母细胞,检测了E2F1、PLK1、BIRC5及PTPN11基因在5例转化的淋巴母细胞及其配对的健康人淋巴细胞中的表达情况。E2F1基因在两种细胞中均表达,与正常人淋巴细胞相比,转化细胞中E2F1的mRNA表达上调3.161倍,差异有统计学意义(P<0.05);
Western blot结果显示,与正常人淋巴细胞相比,E2F1在转化细胞中的蛋白表达上调1.850倍,差异有统计学意义(P<0.05)。
PLK1基因在两种细胞中均表达,与正常人淋巴细胞相比,淋巴母细胞中PLK1的mRNA表达上调11.329倍,差异有统计学意义(P<0.001);
Western blot结果显示,与正常人淋巴细胞相比,PLK1在转化细胞中的蛋白表达上调8.140倍,差异有统计学意义(P<0.001)。
BIRC5基因在两种细胞中均表达,相比正常人淋巴细胞,淋巴母细胞中BIRC5的mRNA表达上调7.921倍,差异有统计学意义(P<0.001);
Western blot结果显示,与正常人淋巴细胞相比,BIRC5在转化细胞中的蛋白表达上调2.065倍,差异有统计学意义(P<0.01)。
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