具核梭杆菌具核亚种冻干管打管说明书!
一、菌种简介
平台编号:bio-03971
提供形式:冻干物
拉丁属名:Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum
中文译名:具核梭杆菌具核亚种
拉丁学名:Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum
原始编号:ATCC 25586
菌株来源:←ATCC
保藏人:周宇光
直接来源国家:美国
保藏时间:3/31/2000
生物危害:三类
模式菌株:模式菌株
菌株用途:模式菌株;media testing, quality control
培养温度:37℃
培养基:0288
其他培养条件:厌氧
分离源:颈-颜面病变
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
二、储存条件
冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。
三、培养条件
EG 培养基
牛肉提取物 2.4 g 月示 胨 10.0 g 酵母提取物 5.0 g
葡萄糖 1.5 g Na2HPO4 4.0 g 可溶性淀粉 0.5 g
脱纤维马血 50.0ml L-半胱氨酸 0.5 g 蒸馏水 1.0 L
PH 7.6-7.8
四、培养方法
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
五、注意事项
1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
2、菌种恢复培养前,建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,如在说明建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成,有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。
3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。
4、恢复培养厌氧菌时,在操作过程中应严格控制厌氧条件:制作培养基时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气,使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。
5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。
六、冻干管打管说明书
1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂(应避免过多水蒸气影响菌种的复苏),用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、用无菌吸管吸取 0.3ml(建议勿超过 0.5ml)适宜的液体培养基(不添加琼脂),滴入管内,轻轻振荡,待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状,在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中(不超过 2 支,中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂,请务必做成试管斜面,配方中没有琼脂,试管中液体培养基不超过 5ml),并在建议的条件下静止培养。
3、冻干管打开后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功。
4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。
6、菌种复苏时,请务必记录好菌种的编号和制备批号,否则不予售后。
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