人微血管內皮細胞株的培养操作规程与处理方法!
细胞简介
平台编号:bio-106081
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
拉丁属名:HMEC-1(人微血管內皮細胞株)(通过STR鉴定)
细胞名称:人微血管內皮細胞株
种属:人源细胞系/血液、淋巴系统
到货周期:10-15个工作日
细胞用途:仅供科研使用。
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
细胞特性
1)来源:血管
2)形态:内皮细胞,贴壁生长
3)含量:>1x10e6 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
细胞接受后的处理:
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
本公司的细胞培养操作规程,供参考
一、培养基及培养冻存条件准备:
1)内皮培养基(ECM: Sciencell 1001);添加10 ng/mL EGF;1 ug/mL氢化可的松;10mM 谷氨酰胺;优质胎牛血清,10%;双抗1%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二、细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
3、轻轻吹打后吸出,移入15ml离心管中,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
下面T25瓶为例;
1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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