人组织细胞淋巴瘤细胞的处理方法与培养步骤!
一、细胞简介
平台编号:bio-53913
规格: 1*10 6
拉丁属名: U-937 人组织细胞淋巴瘤细胞
细胞名称:人组织细胞淋巴瘤细胞
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
二、细胞介绍
该细胞是由Nilsson K实验室于1974年从一名37岁的患有恶性组织细胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分离建立的。1979年来的研究显示该细胞在人混合淋巴细胞培养物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和维A酸的诱导下可以向终末单核细胞分化。该细胞不合成免疫球蛋白,EBV阴性;可产生溶菌酶、β-2-微球蛋白,受PMA刺激后可产生TNF-α;表达C3R;可作转染宿主;表达Fas,对TNF和抗Fas的抗体敏感。
三、细胞特性
1)来源:淋巴瘤
2)形态:单核细胞,悬浮生长
3)含量:>1x106 细胞数
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
四、细胞的运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
五、细胞接收后的处理方法
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
六、细胞培养步骤
1、培养基及培养冻存条件准备:
1)准备1640 培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
2、细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×105~1×106个/mL(不同细胞对密度要求不同,)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
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