大鼠胰岛细胞的背景与应用!
一、背景
大鼠胰岛细胞采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来,细胞经DTZ染色鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠胰岛细胞分离自胰腺组织;胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠,有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成,胰岛主要由4种细胞组成:α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。
α细胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β细胞分泌胰岛素,降低血糖;γ细胞分泌生长抑素,以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌;PP细胞分泌胰多肽,抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。
胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。胰岛占胰腺总质量的1%-2%,每个胰岛大概含有1000个细胞。
胰岛移植可消除常规治疗产生的严重低血糖症状,具有创伤小及并发症少等优点,是最有前景的Ⅰ型糖尿病治疗方案。移植胰岛的获得需经过供体筛选、胰腺消化、胰岛分离纯化及结果鉴定等步骤,分离纯化效果取决于原料及操作方法的选择。
二、应用
用于降糖三黄片对大鼠胰岛细胞凋亡通路影响的研究:
通过观察不同浓度剂量的降糖三黄片对IL-1β诱导的原代大鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨降糖三黄片对死亡受体Fas/FasL的作用途径,探索降糖三黄片治疗和改善胰岛细胞损伤和凋亡的作用机制。
方法:使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得原代胰岛细胞;IL-β作用胰岛细胞24h后,使用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度;RT-PCR法检测降糖三黄片对IL-1β诱导下细胞内FasmRNA、BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响;Western Blot法检测降糖三黄片对IL-1β干预后细胞内Fasl、Cyto-c、capase-3蛋白表达的影响。
结果:1、本实验中使用胆总管逆行灌注、胶原酶V原位消化及Ficoll梯度离心方法从正常SD大鼠胰腺分离纯化获得胰岛细胞,并选用11.lmmol/L葡萄糖浓来度培养细胞。通过测量胰岛素释放量,可制备出细胞形态及功能良好的原代大鼠胰岛细胞。
2、IL-1β作用于胰岛细胞24h后,采用MTT法选择对胰岛细胞具有保护作用的降糖三黄片有效药物浓度,遴选出低(50μg/ml)、中(100μg/ml)、高(200μg/ml)三组剂量。
3、IL-1β与胰岛细胞和共同培养24h后RT-PCR检测发现与空白对组相比IL-1β刺激下胰岛细胞中FasmRNA及BaxmRNA的表达升高、Bcl-2mRNA的表达降低(P<0.05)。
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