粪大肠菌群质控样品使用说明与检验方法！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2022/01/07 15:22

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粪大肠菌群质控样品使用说明与检验方法！

粪大肠菌群是大肠菌群的一种，又名耐热大肠菌群。是指一群好氧及兼性厌氧,在37℃、24h能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌,它主要来源于人畜粪便,通常可作为水体粪便污染的指标菌大肠菌群。

一、基本信息

平台编号：bio-81679

英文名称：Fecal coliform

中文名称：粪大肠菌群质控样品(定量)

模式菌株：模式菌株

需氧类型：好氧

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

二、样品说明

1、测试项目：粪大肠菌群。

2、样品形式：冻干菌粉，包装于真空西林瓶内。

3、样品保存：收到样品后立即按照产品证书中推荐的储存温度保存。

4、样品复溶：样品需要用总计 40mL 稀释液再水化。样品开启后，立即加入 3-4mL 稀释液，待溶解后吸出放入无菌瓶中，再反复用余下的稀释液清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述无菌瓶中，即为待测样品原液，最小取样量为 25mL。

三、注意事项

1、收到样品后，请按照产品标签标注的储存条件保存。

2、从冰箱中取出的样品需在室温平衡 30-60min 再使用。

3、西林瓶内样品处于真空状态，开启时要小心。

4、从开启样品到测试结束均应按照无菌操作进行。

5、冻干粉末状态的样品为一个样品单元，是不可分割的整体，勿取其中一部分测试。

6、稀释液可以用生理盐水或磷酸盐缓冲液。

7、用稀释液溶解样品时，必须在西林瓶中进行，不允许将西林瓶中的样品（冻干菌粉）倒出西林瓶再水化。

8、样品中含有活的微生物（可能含有致病微生物），请不要直接用手接触西林瓶内样品，请在符合生物安全规定的条件下操作。

9、培养过程中请随时观察检测结果并予以记录。

四、在环境污染中的表现形式与存在方式

粪大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示海洋中有否粪便污染。受粪便污染的海洋含有大量的这类菌群。粪大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小，若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染，成为健康风险的指标，从而间接了解海洋是否存在有病原菌的危险性以便及时采取措施进行治理和防护。

粪大肠菌群的对海滨浴场的污染，尤其在暑期，海域人数激增，浴场海水受到污染，会有一些肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌等），存在传染性疾病传播的可能，对海浴者身体健康造成影响；受污染的海域内，部分养殖区生物体内粪大肠菌群数量严重超标，这些经济生物被人类食用，危害人体健康。

五、粪大肠菌群的检验方法

(一)粪大肠菌群与大肠菌群的关系

根据国家颁布的食品卫生微生物检验标准方法(GB4789．3—94)，粪大肠菌群(Fae—cal coliform)系指一群能在44 ℃24 h内发酵乳糖产酸产气和利用色氨酸产生靛基质，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。表5—3中的大肠艾希氏菌I型即属粪大肠菌群。

粪大肠菌群的唯一来源是粪便，因此，唯有粪大肠菌群是粪便污染的确切指标。在被检样品中，如果有粪大肠菌群存在，则在大肠菌群检验中也被计入。因此，也有将大肠菌群数称为总大肠菌群数者。

近年来，曾有人建议采用大肠菌群和粪大肠菌群两种细菌作为食品卫生学的指标菌，如果大肠菌群和粪大肠菌群均高，一般多考虑为近期污染；如果大肠菌群数高，而粪大肠菌群数低，则应着重考虑粪便的远期污染，这在一定条件下，对污染的来源以及工艺学意义可作出恰当的判定。

(二)检验步骤

1、校样的稀释

同大肠菌群。

2、44℃乳糖发酵试验

将检样以无菌操作接种于乳糖胆盐发酵管内(1 mL以上者1 mL及1 mL以内考，用单料乳糖胆盐发酵管)，置(44土0.5) ℃水浴内，培养(24土2) h。经培养后，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为阴性；如果有产气者，则按下列程序进行。

3、证实试验

将所有产气发酵管，分别按种在伊红美蓝琼脂平板上．并同时接种蛋白陈水，置(44土0.5) ℃培养24 h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长，粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂平板上菌落呈紫黑色，有金属光泽，同时做革兰氏染色镜检。在蛋白陈水内加入靛基质试剂约0.5 mL，观察靛基质反应。

4、结果评定

凡靛基质阳性，平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。

5、报告

根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告100 mL(g)粪大肠菌群的最可能数。

（三）大肠菌群快速检验

大肠菌群检验方法(国标)采用发酵法(乳糖发酵试验、分离培养、证实试验)，需3 d。为了方便食品卫生快速监测的实际需要，多年来大肠菌群科研协作组曾在这方面进行了大量研究，并取得了一定成绩。1985年5月在西宁召开了大肠菌群快速检验方法会议，总结了近年来我国大肠菌群快速检验方面的经验，通过24个单位1099件样品(包括乳与乳制品、冷饮、肉制品、豆制品、调味品、啤酒、糕点等)的统计分析，可以认为当前国内应用的三种快速检验方法(TTC显色法、DC试管法和纸片法)的准确性和符合率均高，与发酵法结果相近，并具有快速、简便等优点，18 b一24 h可报告结果。三种快速检验方法在检验结果上与发酵法均无显著差异，且三法各有其持点，在实际工作中，可根据具体情况选作韧筛之用。

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