SMMC-7721(人肝癌细胞)的培养方法！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2022/01/11 14:04

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SMMC-7721(人肝癌细胞)的培养方法！

一、细胞简介

平台编号：bio-105868

规格：1ml/T75

拉丁属名：SMMC-7721(人肝癌细胞)

别称：SMMC 7721; SMMC7721; H7721; H-7721

细胞名称：人肝癌细胞

细胞用途：仅供科研使用。

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。

二、背景描述

SMMC-7721细胞取自人肝癌组织，采用静置和旋转管法培养11天细胞开始生长，首次传代23天。SMMC-7721细胞AFP阳性；用Northern Blot方法，未能检测到SMMC-7721细胞中1.3kb LFIRE-1/HFREP-1 mRNA的表达，免疫缺陷小鼠体内可成瘤。(STR检测位点同HELA)

三、细胞特性

来源：人

形态：上皮细胞样

含量：>1x106 个/mL

污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

四、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

五、细胞培养步骤

（一）培养基及培养冻存条件准备：

1、培养液：DMEM(高糖）+10%FBS

2、培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3、冻存液：90%FBS+10%DMSO，现用现配。液氮储存。

（二）细胞处理：

1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml FBS后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4）将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

六、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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