RM-1小鼠前列腺癌细胞的应用!
一、背景
RM-1小鼠前列腺癌细胞是来源小鼠前列腺癌组织的上皮细胞样贴壁细胞,生长培养基RPMI-1640+10%FBS+1%P/S,培养条件:CO2:5%,37℃。
5-α-双氢睾酮可影响该细胞的生长和酸性磷酸酶的产生。该细胞不形成均一的单层而是成簇生长,所以传代的时候要反复吹打形成单个细胞;该细胞贴壁不牢,达不到汇合状态,而且会使培养基迅速变酸;传代后48h内一定要保持培养瓶静止.如果此时挪动培养瓶,会使大部分细胞从瓶底脱落。如果出现此种情况,需要重新孵育24~48h使细胞重新贴壁,细胞贴壁后可更换培养基。
二、操作步骤
1、复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。
2、弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
3、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
4、加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次。
三、应用
用于雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌作用及其机制的研究:
通过体内、体外实验,探讨方中有效抗癌成分雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能机制,以期为临床提供安全有效的抗前列腺癌药物。
方法:体外实验采用小鼠前列腺癌RM-1传代细胞,用MTT实验检测TL对RM-1细胞的增殖抑制作用;用吖啶橙荧光染色检测TL对RM-1凋亡细胞形态学影响;用流式细胞术分析TL对RM-1细胞周期及凋亡峰的作用;用梯状电泳方法检测TL对RM-1细胞DNA的凋亡作用;用RT-PCR法检测TL对RM-1细胞caspase-3、bcl-2 mRNA表达水平的影响。
体内实验采用C57BL/6小鼠皮下注射RM-1细胞,建立前列腺癌动物模型,检测肿瘤体积和重量计算肿瘤生长抑制率;TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞;免疫组化检测方法观察药物对实验动物肿瘤组织caspase-3基因及其蛋白bcl-2表达水平的影响。
结果:TL(5、10、20、40、80 ng/ml)处理后RM-1细胞生长抑制率分别为9.8%、25.1%、39.2%、48.8%、53.2%,以TL(10、20 ng/ml)处理RM-1细胞12、24、36、48h后,细胞生长抑制率分别为8.4%、25.1%、36.1%、42.4%和10.2%、39.2%、50.2%、58.5%,MTT检测显示雷公藤内酯醇呈剂量和时间依赖性抑制RM-1细胞的生长。
欢迎访问微生物菌种查询网,本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务!与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!
H-EMC-SS人软骨肉瘤细胞的处理方法与培养步骤!
ATCC 25557死亡梭杆菌的特点与优势及微生物培养方法!
人保寿险细胞免疫疗法医疗保险首例赔付圆满成功!
高职学生盲赠造血干细胞:为别人带去希望,值得!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Parabacteroides merdae
Paraburkholderia aromaticivorans
Paraburkholderia caledonica
Paraburkholderia eburnea
Paraburkholderia flava
Paraburkholderia fungorum
Paraburkholderia ginsengiterrae
Paraburkholderia graminis
Paraburkholderia monticola
Paraburkholderia panaciterrae
Xanthobacter agilis
Thermochromatium tepidum
Planctopirus limnophila
关注
拨打电话
留言咨询