SHG-44人胶质瘤细胞的处理方法与应用！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2022/02/10 14:04

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SHG-44人胶质瘤细胞的处理方法与应用！

一、背景

SHG-44人胶质瘤细胞源自一例2-3级前沿淋巴结星细胞瘤，染色体组型显示89.2%的超三倍体。SHG-44细胞在Wistar大鼠和裸鼠中接种都能成功，SHG-44细胞含有神经系统特有的S-100蛋白和星细胞特有的GFA蛋白。

生长培养基：DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S；培养条件气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。

二、细胞处理方法

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）SHG-44人胶质瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

三、应用

用于γ-羟丁酸钠对人胶质瘤细胞SHG-44放疗增敏的实验研究：

探讨γ-羟丁酸钠（gamma-hydroxybutrate，GHB）对胶质瘤细胞SHG-44增殖抑制及放疗增敏机制研究。

方法：以SHG-44细胞为研究对象，MTT法检测不同浓度GHB（2.5mmol/L、5mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L）作用人胶质瘤细胞不同时间（24h、48h、72h）细胞增殖抑制率。Hoechst33258实验观察不同浓度GHB（5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L）作用24h后细胞核变化。

下列实验分为对照组、药物组、照射组、联合组（照射+药物）。流式细胞术（FCM）分析各组细胞周期、凋亡情况。克隆形成实验分析GHB联合不同剂量的X线照射对细胞存活率的影响，拟合存活曲线。

细胞免疫荧光检测SHG-44细胞中HDAC1（Histone deacetylase1，HDAC1）mRNA表达情况。RT-PCR检测各组细胞HDAC1mRNA、ATM（Ataxiatelangiectasia-mutated gene）mRNA的转录水平。

结果：MTT实验显示GHB明显抑制SHG-44细胞的生长，呈浓度和时间依赖性。

Hoechst33258镜下观察时染色体浓缩，见强蓝色荧光。FCM检测联合组细胞周期S期细胞减少，G0/G1期细胞增多，凋亡显著。

克隆形成实验显示联合组的D0、Dq及SF2各值低于照射组（1.764Vs2.237，1.251Vs1.873，0.561Vs0.769），联合组SER为1.27。细胞免疫荧光测得HDAC1主要在SHG-44细胞核中表达。

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