淡紫拟青霉的培养特性与功效及防治方法!
淡紫拟青霉((Paecilomyces lilacinus(Thorn.)Samson)属于内寄生性真菌,是一些植物寄生线虫的重要天敌,能够寄生于卵,也能侵染幼虫和雌虫,可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害。
一、基本信息
淡紫拟青霉,主要特征是分生孢子梗呈瓶状或近球形(瓶梗),在菌丝端或短枝上轮生,分生孢子单孢链状,至今该属报道有近50个种,皆为昆虫病原菌和线虫病原菌。此菌广泛分布于世界各地,具有功效高、寄主广、易培养等优点,特别在控制植物病原线虫方面功效卓著。半个多世纪以来,国内外许多专家学者对此菌进行了广泛而深入的研究,在生物学、生态学、大量培养、控害效能与田间应用等方面取得了一系列研究成果。
二、形态特征
淡紫拟青霉在 28℃、黑暗条件下 ,PDA平板培养3d后长出白色菌落,产孢后逐渐变成浅粉红色,培养 7d后,菌落呈紫红色、圆形、隆起、粉状,表面没有分泌物,产孢量越多,菌落颜色越深。淡紫拟青霉的分生孢子梗末端膨大。分生孢子为单细胞,椭圆形至纺锤形,呈链状、平滑、无色至黄色,2 μm~4μm 宽,孢梗上具有瓶颈状不规则的分枝或轮生分枝,瓶梗基部较宽。轮生分枝由圆柱形的部分组成,有时分枝向远离主轴方向弯曲。
三、培养特性
1、培养条件
温度、光照是影响其生长的最主要因素。Cab.anillasE、王明祖、刘杏忠 、李芳研究了淡紫拟青霉的生长和产孢条件,结果表明:生长温度范围可 以从 8℃~38℃,生长和产孢的最适温度范围是25℃-30℃,10℃和 40℃时停止生长,35℃时停止产孢。全黑暗条件有利生长和产孢,半光照次之,全光照最差。周靖研究结果表明:以蔗糖为碳源(60g/L),硝酸铵为氮源(1.5g/L)。pH5~pH6,培养温度为 30℃时最适合该菌的生长。
2、营养条件
淡紫拟青霉对营养条件要求不高,不仅能在多种常规培养基上生长,而且能在多种自然基质,如农副产品废料、废渣与植物叶片或植物浸提液中生长。王明祖等研究表明认为马铃薯、蛋白胨、蔗糖、硝酸钙、磷酸氢二钠组成的培养基和猪粪浸出液琼脂培养基有利于该菌的营养生长。潘沧桑、邓国平等利用糖厂、啤酒厂、木薯加工废液进行淡紫拟青霉菌剂的生产研究,既可使废料资源化,又可减少环境污染。尽管淡紫拟青霉能在多种培养基质上和多种生态条件下生长,但不同成份的培养基、培养条件,其产菌率与代谢物也有所不同。李芳研究了不同通气量、不同培养基、不同基质浓度对淡紫拟青霉NH-PL-03菌株生长的影响,结果表明,碳氮源浓度为0.045g/ml,每瓶(250ml)装液量为50ml时最适合淡紫拟青霉NH-PL-03菌株菌丝和孢子生长,而对线虫的毒力的最佳装液量为100ml;在孟加拉红、PDA和察氏培养基上,菌丝量增长最为显著,在察氏和燕麦培养基上产孢量最大,培养液滤液的毒力随培养时间延长而升高,在察氏培养基培养毒力较高。梁照文研究了不同液体培养基对淡紫拟青霉繁殖和毒力的影响,筛选了一种高产孢量的培养基,主要成分为200g/L马铃薯、1%鸡蛋黄、20g/L蔗糖。CayrolJC研究表明:利用麦芽培养基在静止、透气状态下生产的菌液,杀线虫活性最强,光照对菌液的毒性没有影响。
四、控害效能
1、对植物病原线虫
淡紫拟青霉是南方根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌,对南方根结线虫的卵寄生率高达60%~70%。对多种线虫都有防治效能,其寄主有根结线虫、胞囊线虫、金色线虫、异皮线虫、甚至人畜肠道蛔虫,是防治根结线虫最有前途的生防制剂。
淡紫拟青霉菌对根结线虫的抑制机理是淡紫拟青霉与线虫卵囊接触后,在粘性基质中,生防菌菌丝包围整个卵,菌丝末端变粗,由于外源性代谢物和真菌几丁质酶的活动使卵壳表层破裂,随后真菌侵入并取而代之。也能分泌毒素对线虫起毒杀作用。
2、对昆虫
据文献资料,淡紫拟青霉可寄生半翅目的荔枝蝽蟓、稻黑蝽;同翅目的叶蝉、褐飞虱;等翅目的白蚁;鞘翅目的甘薯象鼻虫以及鳞翅目的茶蚕、灯蛾等。
3、对植物病原菌
淡紫拟青霉36-1菌株对植物病原菌具有拮抗效能。在玉米小斑病、小麦赤霉病、黄瓜炭疽病菌、棉花枯萎病和水稻恶苗病上试验,淡紫拟青霉菌株活菌体液对其菌丝生长抑制率分别为80.22%、80.50%、77.71%、75.30%和61.36%;处理柑桔果面,青、绿霉扩展抑制率为65.97%。批量处理柑桔,好果率为78.44%,比对照高54.44%。
五、生理功效
1、促进植物生长
在拟青霉的培养过程中,特别是在特殊培养基与深层发酵培养过程中,该菌能产生丰富的衍生物,其一是类似吲哚乙酸产物,它最显著的生理功效是低浓度时促进植物根系与植株的生长,因此在植物根系施菌不仅能明显抑制线虫侵染,而且能促进植株营养器官的生长,同时对种子的萌发与生长也有促进作用。
2、产生多种功能酶
此菌能产生丰富的几丁质酶,几丁质酶对几丁质有降解作用,它能促进线虫卵的孵化,提高拟青霉菌对线虫的寄生率,此外还能产生细胞裂解酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶,Galvez-Mariscal研究表明:在高效菌株中蛋白酶和葡聚糖酶、淀粉酶活性高出1.2~4.2倍和20~120倍,这些酶促进细胞分裂。
3、降解效应
Somaseknar研究发现,淡紫拟青霉能促进难溶磷酸盐的溶解,实验室研究证实:拟青霉菌的增溶效果达到30%,其它线虫拮抗菌达到20%~40%。同类研究还表明,拟青霉还能促进许多化学聚合物(如农药,制革废水等)的分解,这证明淡紫拟青霉具有一定的环保效应。
六、生物防治
1、防治根结线虫
有机蔬菜生产中生物防治植物线虫病的主要生物类型,淡紫拟青霉并提出了提高生物防治效果的途径。植物线虫病在我国局部发生、危害严重,几乎每种作物上都有1~2种线虫病,有的发生面积不断扩大,危害越来越重,已成为农业生产上亟待解决的问题之一。淡紫拟青霉在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染,而且能促进植物根系及植株营养器官的生长,
常规的化学防治的农药的毒性较大,危害绿色食品的生产,所以应寻找新的技术。淡紫拟青霉生物农药生物防治植物病原线虫是研究的热点,已发现可以防治线虫病的生物有捕食线虫的真菌、线虫、涡虫、线蚓、昆虫、螨类等;寄生线虫的病毒、原生动物、细菌等;还可用植物的提取液,其防治效果也较好。
生物防治是病害防治中最具有应用前景的防治方法,符合环保和健康理念。但国内用于防治根结线虫病的生防产品非常少,大多数对根结线虫有作用的生防制剂都还处于研发阶段。在登记的生防产品仅有“线虫必克”和阿维菌素以及最近登记的淡紫拟青霉。在蔬菜根结线虫防治上用的较多的有阿维菌素。可用0.5%阿维菌素颗粒剂15-17.5g/亩进行沟施或穴施。但作为生物农药阿维菌素存在几乎所有生物农药不可避免的弱点,即田间使用效果不太稳定。
根结线虫病主要为害蔬菜根部,侧根和须根最易受害。受害根部产生大小不等的瘤状物或根结,根结初为白色,柔软,后变为浅黄褐色或深褐色,表面粗糙,有时裂开。剖开根结,可看到白色珍珠状小颗粒,是根结线虫的雌成虫。蔬菜受根结线虫侵染后生长发育缓慢,叶片小而黄。发病重时,植株矮小,不结实或结实不良,遇高温干旱天气时,植株易萎蔫甚至枯死。
2、寄生作用
淡紫拟青霉可以寄生多种植物线虫,包括根结线虫、孢囊线虫等重要经济线虫的卵和幼虫,在其代谢过程中,可以产生具有杀线虫活性的物质,抑制线虫的孵化或直接使卵失去活性。弄清楚淡紫拟青霉如何寄生线虫,对于正确使用该生防菌,提高防效有很大帮助。多年来,国内外学者做了大量研究。高学彪和汪军分别采用双温测定法,室内测定淡紫拟青霉对南方根结线虫和香蕉根结线虫卵的相对寄生率为92.6%和94.3%。汪来发研究了来自不同地域的淡紫拟青霉的13个菌株,分别用其孢子液处理南方根结线虫卵囊、孢子液处理分散卵粒、菌丝处理分散卵粒,结果表明了不同菌株对南方根结线虫的寄生能力有很大差异,且用孢子液处理卵囊的寄生率显著高于其他两种处理,寄生能力最强的菌株其寄生率可达74.62%。张雯等研究了淡紫拟青霉对根结线虫的侵染作用,结果发现,菌丝侵入线虫卵消化了卵内容物而卵壳完整,推测几丁质酶在侵染卵过程中起穿透卵壳几丁质层的作用,而不以几丁质为营养。刘国坤对淡紫拟青霉FZ-0289菌株体外寄生南方根结线虫卵进行了研究,结果表明接种7d后,对胚胎发育期卵的寄生率为98.2%,对含卵的寄生率为88.6%,卵囊接种14d后,卵囊内卵寄生率为94.5%。淡紫拟青霉PL050705菌株离体寄生柑橘半穿刺线虫,对胚胎期卵的寄生率为83.33%,对卵内有幼虫卵的寄生率为43.75%。HollandRJ等研究了淡紫拟青霉体外寄生爪哇根结线虫卵、3龄、4龄幼虫和雌虫成虫,结果表明:淡紫拟青霉侵染卵过程中,菌丝首先在卵表面膨大然后形成侵染钉,然后侵入卵,最后菌丝从卵里面继续生长出来或形成孢子,淡紫拟青霉也容易侵染3龄、4龄幼虫和雌虫成虫。KhanA研究了淡紫拟青霉侵染爪哇根结线虫、禾谷孢囊线虫、香蕉穿孔线虫这三种植物线虫,淡紫拟青霉通过菌丝直接穿透爪哇根结线虫体壁,从而侵染卵、幼虫和成虫;胚胎时期卵与含有幼虫的卵相比,较易侵染。淡紫拟青霉也可以侵染体内含有卵的早熟孢囊和香蕉穿孔线虫,但无法侵染成熟的褐色孢囊。
3、寄生机制
专家学者门通过生物化学和分子生物学手段去阐明淡紫拟青霉对植物线虫的寄生机制,一般认为淡紫拟青霉对植物线虫的寄生机制是菌丝机械压力和菌丝分泌的多种酶共同作用的结果。淡紫拟青霉与线虫的孢囊或卵接触后,菌丝顶端变粗,形成侵染钉,随后侵染钉分泌胞外物质(ECM)或粘性物质,在侵染钉的机械压力和分泌物的共同作用下,侵染钉侵入线虫卵壳。胞外物质(ECM)含有蛋白质酶P23,其蛋白水解活性引起卵壳的降解。根结线虫和孢囊线虫卵壳由卵黄层、几丁质层和脂质层组成,其主要成份是几丁质和蛋白质,因此,几丁质酶和蛋白质酶在侵染过程中起到重要作用。
普遍认为淡紫拟青霉专门寄生不动状态的线虫,尤其卵,但也有报道淡紫拟青霉能够寄生活动状态的线虫(幼虫和成虫),尚缺少其寄生活动状态的线虫机制的资料。几丁质酶不仅能能降解线虫卵壳,还能促进线虫的孵化,同时该酶对幼虫有一定的致死作用。PeterJMB研究了淡紫拟青霉与北方根结线虫卵互作,表明淡紫拟青霉在侵染卵的过程中有裂解酶的参与;且胚胎期的卵极易受蛋白酶的破坏,而含幼虫的卵和已孵化的幼虫则对蛋白酶表现出一定的抵抗能力。KhanA用透视电镜研究了蛋白酶和几丁质酶对爪哇根结线虫孵化的影响,结果表明,蛋白酶或几丁质酶显著改变卵壳结构,或使几丁质层变薄、或出现气泡、或出现卵层分离,卵发生了形态学和生理学上的变化,失去完整性,无法进一步发育或孵化。
七、有效成分
淡紫拟青霉活体孢子
毒性:急性经口大鼠LD50大于5400mg/kg,急性吸入大鼠LC50大于2300mg/m3,急性经皮大鼠LD50大于2350 mg/kg,对眼睛和皮肤无刺激性,轻度致敏,对鱼、鸟为低毒,对蜜蜂、家蚕是安全的。
作用机理:淡紫青拟霉孢子萌发后,所产生的菌丝可穿透线虫的卵壳、幼虫及雌性成虫体壁,菌丝在其体内吸取营养,进行繁殖,破坏卵、幼虫及雌性成虫的正常生理代谢,从而导致植物寄生线虫死亡。
防治对象:大豆、番茄、烟草、黄瓜、西瓜、茄子、姜等作物根结线虫、胞囊线虫。
八、使用方法及注意事项
1、拌种按种子量的1%进行拌种后,堆捂2—3小时、阴干即可播种。
2、处理苗床将淡紫拟青霉菌剂与适量基质混匀后撒入苗床,播种覆土。1公斤菌剂处理30—40平方苗床。
3、处理育苗基质将1公斤菌剂均匀拌入2—3方基质中,装入育苗容器中。
4、穴施施在种子或种苗根系附近,亩用量0.5—1公斤。
注意事项:
1、勿与化学杀菌剂混合施用。
2、请注意安全使用,淡紫拟青霉可寄生眼角膜,如不慎进入眼睛,请立即用大量清水冲洗。
3、最佳施药时间为早上或傍晚。勿使药剂直接放置于强阳光下。
4、贮存于阴凉干燥处,勿使药剂受潮。
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