人子宫内膜癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2023/12/14 16:25

人子宫内膜癌细胞的复苏与传代及冻存操作说明！

一、背景

人子宫内膜癌细胞（HEC-1-B细胞）是由H·Kuramoto于1968年分离的HEC-1-A细胞的亚株，不同于HEC-A-1的是，HEC-1-B细胞在培养第135天到190天之间表现出稳定的生长周期，且恢复扁平，与亲本细胞系相比更具铺路石样，HEC-1-B细胞的染色体对是亲本细胞的两倍。

细胞可以在裸鼠中形成与子宫内膜癌（II级）一致的中等分化的腺癌，可以在类固醇治疗的仓鼠中成瘤。HEC-1-B细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究，也是一种合适的转染宿主。HEC-1-B是一种常用的人类子宫内膜癌细胞系，它来源于正常子宫内膜组织，具有较高的增殖能力和侵袭性。在医学研究中，HEC-1-B常用于体外实验，以研究肿瘤生长、侵袭和转移机制，以及药物筛选等。

二、人子宫内膜癌细胞复苏、传代、冻存操作

（一）人子宫内膜癌细胞复苏

①新制100mm平皿1个，含12mL上述培养液；

②人子宫内膜癌细胞冻存管从液氮或-80℃中取出，37℃水浴1~2min,待完全溶解后尽快移入安全柜复苏；

③用无菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，顺时针摇匀；

④放入（37℃，5%CO2）培养箱中，过夜换液，2-4天长满。

注意：建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。

（二）人子宫内膜癌细胞传代

将人子宫内膜癌细胞旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入2mL（/100mm皿/T25瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，人子宫内膜癌细胞刚有脱落时，吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1min取出。传代用6mL培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可1:2传代。

（三）人子宫内膜癌细胞冻存

冻存则用3mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存。

三、应用

人子宫内膜癌细胞可以用于Bmi-1基因在调控人子宫内膜癌细胞HEC-1B辐射耐受性中作用及机制的研究：

研究旨在探讨Bmi-1基因在电离辐射诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖、凋亡、侵袭和迁移中的作用。

方法：采用qRT-PCR检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Bmi-1mRNA表达,IHC染色检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Bmi-1阳性表达率。将HEC-1B细胞随机分为4组:空白组(Control组)、辐射对照组(Radiation group)、Bmi-1过表达组(Bmi-1-OE group)和Bmi-1敲低组(Bmi-1-KD group)。CCK-8检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测各组细胞MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA、p53、p21、Bcl-2蛋白的表达。

结果：子宫内膜癌组织中Bmi-1 mRNA的表达及组织阳性表达均明显高于癌旁组织。经电离辐射后Bmi-1 mRNA水平降低。电离辐射后,与辐射对照组相比,Bmi-1过表达组HEC-1B细胞经电离辐射后的增殖、细胞迁移和侵袭能力明显增强(p<0.05),而Bmi-1敲低组HEC-1B细胞的增殖、细胞迁移和侵袭能力明显减弱(p<0.05)。

Bmi-1过表达组细胞凋亡率显著降低,而Bmi-1敲低组细胞凋亡率显著升高(p<0.05)。Bmi-1过表达组的MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA及p53、p21、Bcl-2蛋白水平显著升高(p<0.05),而Bmi-1敲低组MMP2、MMP7、MMP9、Rock1、RhoA及p53、p21、Bcl-2蛋白水平显著降低(p<0.05)。

结论：Bmi-1在子宫内膜癌组织中高表达,抑制Bmi-1表达可降低电离辐射后HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡的发生,为肿瘤的临床放疗提供了新的见解。

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