你知道贴壁细胞的消化的具体过程有哪些?
贴壁细胞(adherent cells),这类细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面,细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长,繁殖。
贴壁细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生长期。
下面来了解贴壁细胞的消化的具体过程:
1、吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
2、加入少量Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
4、如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
5、如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
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