嗜热菌的检验程序与操作步骤及计算方法与结果报告!
1、检验程序
婴幼儿配方奶粉中嗜热菌的检验程序见图1。
2、操作步骤
2.1 样品的稀释
2.1.1 称取25g样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。
2.1.2 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管或吸头反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。
2.1.3 按2.1.2操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。
2.1.4 根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液,在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌培养皿内,每个稀释度做两个培养皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。
2.1.5及时将15mL~20mL冷却至46℃~50℃的MPC培养基(可放置于48℃±2℃恒温装置中保温)倾注培养皿,并转动培养皿使其混合均匀。
2.2 培养
水平放置待琼脂凝固后,将平板翻转,55℃±1℃培养48h ± 2h,培养过程中注意防止平板干裂。
2.3 菌落计数
2.3.1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony forming unit,CFU)表示。
2.3.2 选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计嗜热菌数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
3、嗜热菌的计算方法
3.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g样品中嗜热菌结果。
3.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:
式中:
N ——样品中嗜落菌菌落数;
ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;
n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;
d ——稀释因子(第一稀释度)。
3.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均嗜落菌菌落数乘以最高稀释倍数计算。
3.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均嗜落菌菌落数乘以稀释倍数计算。
3.5 若所有稀释度平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
3.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4、结果报告
4.1 菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。
4.2 菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。
4.3 若空白对照上有菌落生长,则此次检验结果无效。
4.4 以CFU/g为单位报告。
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