人肝内胆管癌细胞的处理方法与培养步骤及应用!
一、背景
人肝内胆管癌细胞源自一位女性肝胆管细胞癌患者,呈上皮细胞样。HCCC-9810细胞染色体模式数为71,但其染色体数目可以在22-117的范围内变动。HCCC-9810细胞倍增时间为20.4小时;细胞内AFP、CEA和CA19-9的分泌水平低,HCCC-9810细胞在裸鼠中的成瘤率为20%。
二、人肝内胆管癌细胞的培养
1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)人肝内胆管癌细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)人肝内胆管癌细胞冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
三、人肝内胆管癌细胞处理
1)冻存人肝内胆管癌细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)人肝内胆管癌细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)人肝内胆管癌细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
四、应用
人肝内胆管癌细胞可以用于谷氨酰胺酶2介导MDR1表达调控肝内胆管癌细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究:
探讨GLS2在ICC中的化疗耐药的作用及其潜在机制。
方法:首先,通过UALCN在线分析工具在生物信息数据库中检索ICC中GLS2、MDR1表达水平及两者的相关性。运用Western blot、免疫组化临床进一步验证40例ICC组织、癌旁组织GLS2和MDR1表达水平及两者相关性并分析,GLS2表达水平与临床病理因素及患者预后之间的相关性。然后,过表达RBE细胞GLS2表达,Western blot验证过表达效率。之后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测过表达GLS2细胞及NC细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的化疗敏感性。
最后,Western blot检测过表达GLS2的ICC细胞及NC细胞MDR1的表达,初步阐明GLS2调控ICC化疗耐药潜在分子机制。
结果:
1、数据库分析结果显示在ICC癌组织中GLS2表达水平显著低于正常肝组织,而MDR1表达水平显著高于正常肝组织,并且GLS2表达与MDR1表达呈负相关。进一步Western blot和免疫组化验证,可以得到与之前一致的结果。GLS2蛋白表达与肿瘤数量、包膜、淋巴结转移、临床分期有关,GLS2表达越高,ICC患者预后越好。
2、上调RBE细胞GLS2表达后,可显著提高RBE细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性。
3、上调RBE细胞GLS2表达后可显著降低MDR1表达。
结论:GLS2通过介导MDR1表达提高ICC细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性化疗敏感性,并且GLS2的表达越高提示患者预后越好。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!
H-EMC-SS人软骨肉瘤细胞的处理方法与培养步骤!
ATCC 25557死亡梭杆菌的特点与优势及微生物培养方法!
人保寿险细胞免疫疗法医疗保险首例赔付圆满成功!
高职学生盲赠造血干细胞:为别人带去希望,值得!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Parabacteroides merdae
Paraburkholderia aromaticivorans
Paraburkholderia caledonica
Paraburkholderia eburnea
Paraburkholderia flava
Paraburkholderia fungorum
Paraburkholderia ginsengiterrae
Paraburkholderia graminis
Paraburkholderia monticola
Paraburkholderia panaciterrae
Xanthobacter agilis
Thermochromatium tepidum
Planctopirus limnophila
关注
拨打电话
留言咨询