细菌的特殊结构及其染色方法与注意事项!
一、荚膜
某些细菌生活在一定的营养条件下时,会在细胞壁表面形成一层松散的粘液状物质,称为荚膜,一般由多糖和多肽组成。荚膜能够保护细胞免遭干燥影响,同时也是细胞外的碳源和能源的储备物质。当环境缺乏营养时,可被细胞利用。从临床方面来讲荚膜可以保护病原菌免遭宿主吞噬细胞的吞噬,增强其致病能力。如具有荚膜的S 型肺炎球对人体毒力强,能引起肺炎,但如果细胞失去荚膜(即成为R型菌株)后,致病力就下降。
因荚膜是由细菌细胞壁外的一层粘液性多糖类物质组成,其对染料的亲和力较弱,因此不容易着色,通常采用负染色法进行染色,让菌体和背景着色,而荚膜不着色,从而使菌体周围呈现透明圈。
荚膜染色方法:
第一步:需要制作适当厚度的细菌涂片,涂片时可多挑些菌体与水充分混合,并将粘稠的菌液尽量涂开,但涂布的面积不宜过大,在空气中自然干燥,不要加热固定。
第二步:滴加适量的结晶紫染色液于载玻片上,完全覆盖菌体,静置染色5-7分钟。
第三步:用20%硫酸铜水溶液冲洗涂片,冲洗要适度,2-3遍即可。
第四步:用吸水纸吸干多余的水分,并立刻滴加1-2滴香柏油,以免形成CuSO4结晶。
第五步:使用显微镜镜检观察。
二、鞭毛
鞭毛是生长在细菌菌体表面的细长、弯曲的,具有运动功能的蛋白质附属物。鞭毛的数目大约有一至数十条,长度约为15-20μm,直径为0.01-0.02μm。鞭毛是细菌的运动器官,观察细菌鞭毛对于细菌鉴定有十分重要的意义。依据鞭毛的有无、位置和数量,细菌分为无鞭毛菌、单端极鞭毛菌、单端双鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌等。
一般情况下,因鞭毛较细,在光学显微镜下不易观察,通常需使用电镜进行观察,但通过特殊染色方法使染料沉积在鞭毛上使其加粗,就可克服上述困难。
鞭毛染色方法:
第一步:挑选活力较强的幼龄细菌进行涂片,挑取菌的时候尽量不要带有培养基,涂片的玻片必须清洗干净,染色前可用洗衣粉洗净并在酒精中浸泡24h,用前擦拭干净后使用。
第二步:将菌落轻点在玻片上,倾斜玻片让菌液自然留下,不要用接种环涂抹或用力过猛,以免破坏鞭毛。
第三步:静置待其自然干燥。
第四步:滴加鞭毛染色液 2-3滴,在室温中染色10分钟。
第五步:直接用蒸馏水缓慢冲洗染液,不要先倾去染液后再水洗,以免污染背景不易观察,冲洗时要将染液的颜色冲洗干净否则也会影响观察。
第六步:使用显微镜镜检观察。镜检时先从边缘开始逐渐向中间镜检,因为边缘处菌量小,易观察到单菌落,中心处菌易重叠,不易观察。
三、芽孢
芽胞是芽胞杆菌休眠期的一种特殊形态。芽胞的形态包括芽胞形状、芽胞位置和胞子囊膨大,芽胞形态分为圆柱形、椭圆形、球形,芽胞位置分为端生、近端生、中生或近中生。具有非常强劲的抗热、抗化学药物、抗辐射性能。根据芽胞的形态学可以对芽胞杆菌属和梭菌属进行初步鉴定。
芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难。因此,用着色力强的染色剂(如孔雀石绿)在加热条件下进行染色时,染料不仅可以进入菌体,而且也可以进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染色的染料则难以透出,若再用复染液(如沙黄水溶液)染色后,芽孢仍然保留初染剂的颜色,而菌体被染成复染剂的颜色,即菌体和芽孢分别染成红色和绿色易于区分。
芽孢染色方法:
第一步:常规涂片,待干燥后,通过火焰上方3次,进行固定。
第二步:滴加3-4滴孔雀石绿水溶液于涂片上。
第三步:用木夹夹住载玻片在火焰上持续加热6-8s,使染液冒蒸汽但不沸腾。
第四步:待玻片冷却后,倾去染液,水洗至不再褪色为止。
第五步:用番红溶液复染1min,水洗至水为无色。
第六步:待其干燥后,使用显微镜镜检观察。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!
IM-9 (人外周血B淋巴细胞)的转化方法与实验步骤!
帕氏食氢产水菌的形态特征与实验内容及使用范围!
ATCC 27340 延长布劳特氏菌的培养方法与操作步骤!
免疫细胞临床与免疫细胞疗法:未来医学的新方法!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Hymenobacter fastidiosus
Conexibacter woesei
Conchiformibius steedae
Conchiformibius kuhniae
Companilactobacillus zhongbaensis
Companilactobacillus versmoldensis
Companilactobacillus tucceti
Companilactobacillus suantsaicola
Companilactobacillus paralimentarius
Companilactobacillus pabuli
Desulfobacter hydrogenophilus
Desulfobacter latus
Desulfobacterium autotrophicum
关注
拨打电话
留言咨询