人白血病细胞的知识与应用及培养操作步骤!
一、背景
人白血病细胞是一种起始于血液形成组织的癌症。白血病细胞是一种异常的白细胞,它不会在应该死亡的时候死亡,反而会过度增殖,影响正常的血细胞,如白细胞、红细胞和血小板。白血病主要分为急性白血病和慢性白血病两大类,包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性粒细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)以及慢性粒细胞白血病(CML)等。
人白血病细胞(NOMO-1 Cell)是从一名25岁的白人男性肺腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞具有淋巴母细胞样的形态特征,并且能够在体外培养中表现出悬浮生长的特点。在科学研究领域,NOMO-1 Cell被广泛应用于白血病的研究、药物筛选和毒性测试等方面。
二、人白血病细胞培养步骤
1、人白血病细胞培养基及培养冻存条件准备:
1)准备基础培养基(GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L);优质胎牛血清,10%。
2)人白血病细胞培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2、人白血病细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)NOMO-1人白血病细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)人白血病细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
三、应用
人白血病细胞可以用于Venetoclax联合地塞米松对急性髓系白血病细胞的作用及初步机制研究:
探索BCL-2抑制剂Venetoclax联合地塞米松在体外对急性髓系白血病(AML)细胞的抗肿瘤作用,以及减弱骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对AML细胞系的保护作用及其潜在的调控机制。
方法:Venetoclax和地塞米松单独或联合处理AML细胞系MOLM-13、NOMO1和THP-1,实验分组:未加药的对照组、Venetoclax单药组、地塞米松单药组、Venetoclax和地塞米松联合组;通过CCK-8检测AML细胞的活力;通过Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测其凋亡;通过Western blot(WB)检测凋亡相关蛋白PARP,BCL-2家族蛋白BCL-2、MCL-1和BCL-XL等蛋白的表达水平;qRT-PCR验证BCL-2家族BCL-2、MCL-1和BCL-XL等基因的表达;使用Mitotracker Deep Red试剂对MSCs的线粒体进行染色,然后将其与AML细胞共培养,Venetoclax与地塞米松单独或联合作用于共培养体系,实验分组同上,通过流式细胞术检测AML细胞的凋亡、线粒体膜电位(MMP)、活性氧(ROS)水平和线粒体荧光信号。
结果:地塞米松对AML细胞活力和凋亡没有显著影响。相对于Venetoclax单药处理,地塞米松与Venetoclax联合后,会增强Venetoclax的降低AML细胞活力的作用,引起更多的AML细胞凋亡。WB结果表明,与对照组相比,地塞米松单独使用会增加AML细胞中MCL-1蛋白的表达,地塞米松与Venetoclax联合作用,也增加了AML细胞中MCL-1蛋白的表达。AML细胞与MSCs共培养后,MSCs的存在减少了Venetoclax诱导的AML细胞凋亡,地塞米松联合Venetoclax仍会增加Venetoclax诱导的凋亡。
共培养时,Venetoclax会增加AML细胞中的ROS水平和MSCs向AML细胞转移的线粒体,地塞米松会降低AML细胞中的ROS水平和MSCs向AML细胞转移的线粒体,地塞米松联合Venetoclax会降低AML细胞中Venetoclax诱导的ROS水平,使MSCs向AML细胞转移的线粒体减少,这可能会导致MSCs对AML细胞的保护作用减弱。
结论:地塞米松增强了Venetoclax在体外的抗肿瘤效果,Venetoclax联合地塞米松会减少AML细胞中Venetoclax诱导的ROS水平,并减少MSCs向AML细胞转移的线粒体,这可能导致减弱MSCs对AML细胞的保护作用。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
H-EMC-SS人软骨肉瘤细胞的处理方法与培养步骤!
ATCC 25557死亡梭杆菌的特点与优势及微生物培养方法!
人保寿险细胞免疫疗法医疗保险首例赔付圆满成功!
高职学生盲赠造血干细胞:为别人带去希望,值得!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Parabacteroides merdae
Paraburkholderia aromaticivorans
Paraburkholderia caledonica
Paraburkholderia eburnea
Paraburkholderia flava
Paraburkholderia fungorum
Paraburkholderia ginsengiterrae
Paraburkholderia graminis
Paraburkholderia monticola
Paraburkholderia panaciterrae
Xanthobacter agilis
Thermochromatium tepidum
Planctopirus limnophila
关注
拨打电话
留言咨询