BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系的培养操作步骤及应用！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/13 16:47

BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系的培养操作步骤及应用！

一、背景

BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系建系于1989年，该细胞系来源于人膀胱乳头状移行上皮癌，通常采用5×108细胞0.2mL接种裸鼠皮下，呈进行性肿瘤生长，肿瘤结节病检与原标本癌组织相似。22代细胞群体倍增时间为34小时。细胞能在软琼脂上生长，克隆形成率23%。BIU-87细胞系对ConA，WGA，PSL均有凝集反应。

二、BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系细胞培养操作

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类；

1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

BIU-87人膀胱癌贴壁细胞系可以用于siRNA DAD1联合人参皂苷Rh2对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的实验研究：

研究siRNA沉默DAD1基因对人参皂苷Rh2体外抗膀胱癌效果的影响,探讨中药提取物人参皂苷Rh2联合RNAi技术抗肿瘤的可能性和实验效果,为临床的综合抗肿瘤治疗提供实验室依据。

方法：本研究主要对象是人膀胱癌细胞BIU-87:首先采用不同浓度人参皂苷Rh2作用于膀胱癌细胞株BIU-87,MTT法检测其增殖能力,筛选出最适宜的人参皂苷Rh2作用条件;然后人参皂苷Rh2联合转染siRNA-DAD1干预膀胱癌细胞株BIU-87;MTT法检测联合作用后的BIU-87细胞增殖能力;实时荧光定量PCR检测DAD1 mRNA的表达水平;免疫印迹法检测DAD1蛋白的表达水平;流式细胞术检测膀胱癌细胞BIU-87的凋亡水平;Transwell检测各组膀胱癌细胞株BIU-87的侵袭能力变化。

结果：人参皂苷Rh2不同浓度和干预时间可以对膀胱癌细胞BIU-87的增殖能力有一定程度的抑制作用(P<0.05);人参皂苷Rh2 40umol/L联合siRNA-DAD1作用膀胱癌细胞BIU-87后,MTT法检测膀胱癌细胞BIU-87的增殖水平下降(P<0.05);荧光定量PCR检测结果显示膀胱癌细胞BIU-87中的DAD1 mRNA表达水平降低了(P<0.05);免疫印迹检测结果显示膀胱癌细胞BIU-87中的DAD1蛋白表达水平降低了(P<0.05);流式细胞术实验结果显示膀胱癌细胞BIU-87的凋亡水平升高了(P<0.05);Transwell检测结果显示膀胱癌细胞BIU-87的侵袭能力显著下降(P<0.05)。

结论：

1、一定浓度的人参皂苷Rh2可以抑制膀胱癌细胞BIU-87增殖。

2、人参皂苷Rh2联合siRNA-DAD1作用于膀胱癌细胞BIU-87可以显著抑制DAD1的表达,并且促使其发生凋亡,抑制其侵袭能力。

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