放射形根瘤菌的培养条件与注意事项及打管说明！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/13 16:52

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放射形根瘤菌的培养条件与注意事项及打管说明！

放射形根瘤菌是Rhizobium属的微生物，原产地为中国。主要用途为研究；教学，具体用途为固氮。

一、菌种简介

平台编号：Bio-02238

提供形式：冻干物

拉丁属名：Rhizobium Radiobacter

中文译名：放射形根瘤菌

拉丁学名：Rhizobium radiobacter

原始编号：C58Ti

菌株来源：←复旦大学遗传研究所←南巴黎大学微生物所

保藏人：盛祖嘉

直接来源国家：法国

保藏时间：10/1/1980

其他保藏编号：=ATCC 33970

生物危害：四类

模式菌株：非模式菌株

菌株用途：遗传研究；携带温度敏感质粒，核酸内切酶AtuCI

培养温度：30℃

培养基：0032

用途：遗传研究；携带温度敏感质粒，核酸内切酶AtuCI

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、形态特征

杆菌0.5-0.9×1.2-3.0μm。在不利的生长条件下，通常为多形态。以两根到六根周生鞭毛或以一根极生或亚极生鞭毛运动。不形成芽孢。革兰氏染色阴性。在碳水化合物培养基上的生长物常伴生有丰富的胞外多糖粘液。有机化能营养，呼吸代谢。不生成3-酮基葡萄糖。不液化明胶或二个月内缓慢液化。不水解酪蛋白和洋菜。在硫酸铋洋菜培养基上仅有微量的硫化氢产生或甚至不产生。菌落无色或白色。能利用很多种类的碳水化合物，不形成气体，但不利用纤维素或淀粉。能以铵盐、硝酸盐和大多数氨基酸作为氮源。好氧，在氧压不足0.01大气压下，长能茂盛的生长。最适温度25-30℃.pH生长范围5.0-8.5. 能侵入豆科植物的根毛并刺激形成根瘤。通常以多形态（类菌体）而生存于根瘤中，单个的或成小群的包围在植物生成的膜囊内。

三、储存条件

冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。甘油菌液请置于-80℃保藏。

四、培养条件

BPY 琼脂

牛肉提取物 5.0 g 蛋白胨 10.0 g 酵母提取物 5.0 g 葡萄糖 5.0 g

NaCl 5.0 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1.0 L pH 7.0

五、注意事项

1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。

2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。

3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。

4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。

5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。

六、冻干管打管说明书

1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。

3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。

4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。

5、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理。

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