SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系的应用！

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2024/03/16 11:17

SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系的应用！

一、背景

SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系是一种常用的实验细胞系，通常用于研究淋巴细胞的生物学特性和基因表达。这种细胞系具有某些独特的特征，例如高增殖能力、稳定的生长特性以及容易进行基因转染等，使其在基础研究和应用研究中具有广泛的应用价值。

SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系是一种小鼠骨髓瘤细胞系，由Ludwig等人在1980年代初期建立。这种细胞系来源于C57BL/6小鼠的骨髓瘤细胞，经过多次传代和适应性培养，使其成为一种适合用于各种实验研究的高质量细胞系。

在细胞形态学方面，SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系为圆形或卵圆形，具有贴壁生长的特性。这些细胞通常处于悬浮状态，但也可以在适当的条件下进行固定和染色，以便进行显微观察和分析。

在遗传学方面，SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系具有稳定的基因组，可以进行各种基因操作，例如基因敲除、转染和表达等。此外，这种细胞系还可以用于制备抗体和其他生物分子，为生物医学研究提供了重要的工具和资源。

二、SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系培养操作

1)复苏SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

SP2/MIL-6小鼠骨髓瘤B淋巴悬浮细胞系可以用于MRL/lpr小鼠骨髓CXCL12表达失调促进B淋巴细胞向骨髓归巢：

研究MRL/lpr狼疮鼠骨髓微环境中成骨细胞(Osteoblasts,OB)表面CXCL12对B淋巴细胞归巢的影响;研究系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓及外周血中CXCR4+B淋巴细胞比例及CXCL12的表达,以及与疾病活动标志物的相关性。

方法：

(1)流式细胞术检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠外周血、骨髓及脾脏中CXCR4+B淋巴细胞的比例差异;qRT-PCR法检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠外周血、骨髓及脾脏中CXCL12表达差异;免疫荧光检测C57BL/6和MRL/lpr小鼠骨髓微环境中CXCL12、成骨细胞OB及B淋巴细胞的空间关系。

(2)在体研究B淋巴细胞归巢实验:体内输注实验分组:1、C57BL/6小鼠;2、MRL/lpr小鼠;3、用CXCL12拮抗剂LIT-927提前12小时灌胃的MRL/lpr小鼠(MRL/lpr+LIT-927)。取MRL/lpr狼疮小鼠脾脏,通过磁珠分选术分选出B220+的B淋巴细胞,通过流式细胞术检测分选出的B淋巴细胞纯度,随后用活细胞染料CFDA-SE对分选出的B淋巴细胞进行荧光染色,流式细胞术检测CFDA染色效率。将CFDA标记的B淋巴细胞(CFDA+B)通过尾静脉分别输注到三组小鼠体内,24小时后通过流式细胞术检测三组小鼠骨髓中CFDA阳性的B淋巴细胞比例。

(3)取发病的同周龄的MRL/lpr小鼠分为两组,一组用LIT-927灌胃(9.2mg/20g),另一组用等量LIT-927溶剂CMC-Na灌胃,每两天一次,共两周。两周后,取两组小鼠外周血及骨髓,通过流式细胞术检测CXCR4+B淋巴细胞及浆细胞的比例及骨髓中pre-pro-B(CD19-B220+)及pro-B(CD19+B220+)细胞的比例。

(4)收取临床上确诊为SLE患者10例和健康对照组3例的骨髓,以及SLE患者4例和健康对照组6例的外周血,流式细胞术检测CXCR4+B淋巴细胞比例;酶联免疫吸附法检测骨髓及外周血中CXCL12的表达;收集SLE患者临床资料,与骨髓CXCR4+B淋巴细胞比例及CXCL12表达水平进行相关性分析。

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