刺糖多孢菌——土壤微生物资源调查及分类学研究
刺糖多孢菌是Saccharopolyspora属的微生物,原产地为中国。非模式菌株。基内菌丝在菌中央断裂为不规则杆状体,气生菌丝上有圈环状或松散螺旋形的短孢子链,用于土壤微生物资源调查及分类学研究。主要用途为分类;教学,具体用途为土壤微生物资源调查及分类学研究。
一、菌种简介
平台编号:Bio-136770
规格:冻干粉
拉丁属名:Saccharopolyspora Spinosa
中文名称:刺糖多孢菌
属名:Saccharopolyspora
种名或亚种名:spinosa
来源历史:四川大学生命科学学院
收藏时间:1998-11-10
原始编号:980332
原产国:中国
模式菌株:非模式菌株
主要用途:分类;研究;教学
特征特性:非模式菌株。基内菌丝在菌中央断裂为不规则杆状体,气生菌丝上有圈环状或松散螺旋形的短孢子链,用于土壤微生物资源调查及分类学研究。
具体用途:土壤微生物资源调查及分类学研究
生物安全等级:四类
致病对象:无
致病名称:传播途径与感染方式
分离基物:土壤
采集地区:云南昆明
培养基编号:0039
培养温度:28℃
用途:土壤微生物资源调查及分类学研究土壤
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)
二、培养方法
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、产品仅用于科研挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养4天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至0%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在0%~20%。
三、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
四、保藏方法
1、斜面低温保藏法
产品仅用于科研将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长*后,置于4℃左右的冰箱中保藏,每隔一定时间(保藏期)再转接至新的斜面培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断。此法简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。
2、石蜡油封藏法
此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面(或半固体穿刺培养物)上,石蜡油层高出斜面顶端lcm,使培养物与空气隔绝,加胶塞并用固体石蜡封口后,垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。由于液体石蜡阻隔了空气,使菌体处于缺氧状态下,而且又防止了水分挥发,使培养物不会干裂,因而能使保藏期达~2年,或更长。但此法不适合厌氧性细菌。
3、砂土管保藏法
适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌,对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用。砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件,故保藏期较长、效果较好,且微生物移接方便,经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长,约~0年。
4、麸皮保藏法
此法以麸皮作为载体,吸附接入的孢子,然后在低温干燥条件下保存。适用于产孢子的霉菌和某些放线菌,保藏期在年以上。因操作简单,经济实惠,工厂较多采用。
5、冷冻真空干燥保藏法
简称冻干法,通常采用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中,再在低温下快速将含菌样冻结,并减压抽真空,使水升华将样品脱水干燥,形成*干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封,造成无氧真空环境,置于低温下,使微生物处于休眠状态,而得以保藏。常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。
6、液氮超低温保藏法
以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂,在液氮超低温(-96℃)下保藏。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温,并在降到低温之前,使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来,以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。此法操作简便、高效、保藏期一般可达到5年以上,是目前被公认的效的菌种保藏技术之一。
五、注意事项
1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
2、菌种恢复培养前,建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,如在说明建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成,有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。
3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。
4、恢复培养厌氧菌时,在操作过程中应严格控制厌氧条件:制作培养基时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气,使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。
5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。
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