201T人肺腺癌细胞系的特点与应用及培养操作！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/22 16:07

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201T人肺腺癌细胞系的特点与应用及培养操作！

一、背景

201T人肺腺癌细胞系是一种来源于人类肺腺癌(adenocarcinoma of the lung)的细胞系。这种细胞系通常用于研究肺腺癌的生物学特性、药物筛选和治疗方案开发等方面。

二、201T细胞系具有以下特点

来源：201T细胞系来源于一名55岁男性肺腺癌患者的肿瘤组织。

形态特征：201T细胞呈多边形或长方形，具有多核和核分裂像。

生长特性：201T细胞在体外培养条件下生长迅速，具有良好的增殖能力。

分子特征：201T细胞表达多种肺腺癌相关的分子标志物，如EGFR、KRAS等。

药物敏感性：201T细胞对多种化疗药物具有敏感性，如紫杉醇、顺铂等。

基因突变：201T细胞中存在多个与肺腺癌发生相关的基因突变，如EGFR、KRAS等。

201T人肺腺癌细胞系为肺腺癌的研究提供了一个重要的实验模型，有助于深入了解该疾病的发病机制、寻找新的治疗方法和药物筛选。

三、201T人肺腺癌细胞系细胞培养操作

1)复苏201T人肺腺癌细胞系细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)201T人肺腺癌细胞系细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)201T人肺腺癌细胞系细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、应用

201T人肺腺癌细胞系可以用于GRK6基因在肺腺癌中的作用及机制研究：

人肺腺癌中GRK6基因的表达情况及其与临床病理参数之间的关系,阐明GRK6在肺腺癌中表达下调的可能原因以及转录因子C/EBPa对其相关调控机制,探讨C/EBPa/GRK6信号通路在肺腺癌细胞迁移侵袭中的作用。

研究方法：

1、用免疫组化法测定包含122例肺腺癌和45例正常肺组织的组织芯片GRK6基因蛋白表达,蛋白免疫印迹检测18例新鲜肺腺癌组织标本和邻近的非癌肺组织标本的蛋白表达,qPCR测定20例新鲜肺腺癌患者癌组织中及匹配的邻近的非癌肺组织标本中GRK6基因的mRNA。统计分析GRK6蛋白表达水平与相关临床病理参数及预后的关系;

2、应用甲基化特异性PCR和亚硫酸氢盐测序PCR检测54例肺腺癌临床标本中GRK6基因启动子区的甲基化状态,分析GRK6基因启动子区的甲基化状态与临床病理参数及预后的关系,并应用亚硫酸氢盐测序PCR检测肺癌细胞系A549、A427、201T人肺腺癌细胞系、H1299和支气管细胞系16HBE中GRK6基因启动子区的甲基化状态,进一步应用甲基化转移酶抑制剂处理肺癌细胞后观察GRK6基因表达水平的变化;

3、应用生物信息学及染色质免疫共沉淀技术探索并验证可能参与调控GRK6基因表达的转录因子C/EBPa,利用野生型和突变型的GRK6启动子构建重组质粒,并进行荧光素酶报告基因检测以研究C/EBPa与GRK6可能的结合位点对GRK6基因转录的影响。利用染色质免疫共沉淀技术检测肺腺癌组织和邻近的非癌肺组织中C/EBPa和GRK6基因启动子之间的结合情况。对肺癌细胞系A549应用5-氮杂-2’-脱氧胞苷进行去甲基化处理,染色质免疫共沉淀法检测C/EBPa和GRK6基因启动子区结合变化情况;4、通过沉默及过表达C/EBPa观察GRK6的表达,通过沉默及过表达GRK6观察肺腺癌细胞迁移与侵袭能力的变化,调控肺癌细胞A549、201T人肺腺癌细胞系及H1299的GRK6表达水平观察EMT相关标记物E-钙黏蛋白和波形蛋白水平的变化,过表达肺癌细胞A549的GRK6水平,观察MMP2、MMP7水平的变化。

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