小鼠胃平滑肌细胞的知识与培养操作步骤及应用！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/25 16:30

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小鼠胃平滑肌细胞的知识与培养操作步骤及应用！

一、背景

小鼠胃平滑肌细胞是一种用于研究胃部疾病的细胞模型。通过使用小鼠胃平滑肌细胞，科学家们可以研究胃部疾病的病因、病理生理过程以及药物的作用机制。

小鼠胃平滑肌细胞具有与人体相似的生理功能和基因表达模式，因此被广泛用于药物筛选和疾病模型的研究。这些细胞可以用于研究胃溃疡、胃炎、胃癌等疾病的发病机制和药物治疗效果。

此外，小鼠胃平滑肌细胞还可以用于研究胃肠激素的作用机制和信号转导通路。这些激素在调节消化、吸收、代谢等方面发挥着重要作用，因此对这些激素的研究有助于深入了解胃肠功能和疾病的发生机制。

小鼠胃平滑肌细胞(mouse gastric smooth muscle cells)是存在于小鼠胃部的平滑肌细胞，主要负责胃的收缩和运动，以帮助消化食物。这些细胞具有以下几个主要特点：

形态特征：小鼠胃平滑肌细胞呈长条形或梭形，有多个分支状突起，细胞核位于中央。

生理功能：小鼠胃平滑肌细胞具有自主收缩和节律性收缩的能力，能够控制胃的蠕动和排空，从而帮助消化食物。

与疾病相关：小鼠胃平滑肌细胞的异常增殖或功能障碍可能与一些胃肠道疾病相关，如胃溃疡、胃癌等。

研究应用：小鼠胃平滑肌细胞可用于研究胃肠道疾病的发病机制、药物筛选和治疗等方面。例如，通过基因敲除或过表达技术，可以研究特定基因对小鼠胃平滑肌细胞功能的影响。

二、小鼠胃平滑肌细胞培养操作

1)复苏小鼠胃平滑肌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)小鼠胃平滑肌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)小鼠胃平滑肌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

三、应用

小鼠胃平滑肌细胞可以用于柴胡疏肝散对功能性消化不良小鼠胃平滑肌细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响：

探讨柴胡疏肝散对功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)小鼠胃平滑肌细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,以进一步揭示疏肝理气法促胃动力机制。

方法：将48只健康SD小鼠随机分为正常组、模型组、多潘立酮组及柴胡疏肝散低、中、高剂量组。除正常组外,其余五组均通过改良夹尾激惹刺激法制造FD大鼠模型,于造模同一天分别使用多潘立酮水溶液(0.3g·L-1)和柴胡疏肝散低、中、高剂量水煎剂(0.16g?mL-1,0.32g?mL-1,0.64g?mL-1)进行灌胃,在造模4周后,测定各组小鼠胃排空率,采用HE染色观察胃组织病理变化,利用透射电子显微镜观察大鼠胃平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)线粒体形态,采用原位末端缺口标记法(TdT-mediated d UTP Nick-End Labeling,TUNEL)检测小鼠胃SMC凋亡情况;免疫组化法检测小鼠胃平滑肌细胞Bcl-2、Bax、NF-KB蛋白的表达。结果:各组大鼠胃组织病理学观察未见糜烂、溃疡、化生等器质性病变。

透射电镜观察胃组织发现正常组小鼠胃SMC之间间隙正常,连接紧密,线粒体形态正常;模型组小鼠胃SMC间隙增宽,连接松弛,线粒体明显肿胀,亦可见凋亡小体;多潘立酮组和柴胡疏肝散低、中、高剂量组胃SMC间隙正常,连接紧密,线粒体肿胀减轻,凋亡小体减少。与正常组比较,模型组大鼠胃排空率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),小鼠胃平滑肌细胞Bcl-2表达显著减少(P<0.05),Bax、NF-KB表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,柴胡疏肝散低、中、高剂量组和多潘立酮组大鼠胃排空率均显著升高(均P<0.05),胃SMC线粒体损伤显著改善,细胞凋亡率和Bax、NF-KB表达水平均显著降低(均P<0.05),Bcl-2表达水平则显著升高(P<0.05);与多潘立酮组比较,柴胡疏肝散高剂量组胃排空率显著升高(P<0.05),胃SMC凋亡率和Bax、NF-KB表达水平均显著降低(均P<0.05),Bcl-2表达水平则显著升高(P<0.05);柴胡疏肝散低、中、高剂量组间比较,中、高剂量组胃排空率和Bcl-2表达水平较低剂量组有显著升高(均P<0.05),中、高剂量组胃SMC凋亡率、Bax、NF-KB表达水平较低剂量组显著降低(均P<0.05)。

结论：

1、柴胡疏肝散可以降小鼠胃平滑肌细胞的凋亡率,从而发挥促胃动力作用,其机制是通过上调Bcl-2的表达、抑制Bax的表达来调节线粒体途径的细胞凋亡来发挥作用。

2、FD的发生、发展可能与胃平滑肌NF-κB蛋白的表达密切相关;柴胡疏肝散可以减少NF-κB蛋白的表达,抑制NF-κB凋亡信号通路异常激活导致的胃平滑肌的损伤,促进胃肠动力的恢复。

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