新港沙门氏菌PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/27 15:54

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新港沙门氏菌PCR试剂盒的知识与应用及操作步骤！

一、背景

新港沙门氏菌PCR试剂盒是一种用于检测新港沙门氏菌的生物试剂，采用PCR技术进行检测。该试剂盒具有高灵敏度、特异性强、操作简便等特点，可用于科研实验、临床检测等领域。

使用新港沙门氏菌PCR试剂盒可以快速、准确地检测新港沙门氏菌，对于该菌引起的食物中毒、感染等的诊断和治疗具有重要意义。

新港沙门氏菌PCR试剂盒是一种用于检测新港沙门氏菌DNA的PCR试剂盒。该试剂盒通常包括以下成分：

PCR反应液：包括PCR缓冲液、dNTPs、引物、Taq聚合酶等。

标准品：用于定量检测新港沙门氏菌DNA的浓度。

阴性对照：用于排除假阳性结果的可能性。

阳性对照：用于确认试剂盒的准确性和可靠性。

使用新港沙门氏菌PCR试剂盒时，首先需要提取样本中的DNA，然后将提取的DNA加入到PCR反应液中进行扩增。通过检测扩增产物的荧光信号强度，可以确定样本中是否存在新港沙门氏菌DNA。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于临床诊断和流行病学调查等领域。

二、新港沙门氏菌PCR试剂盒的操作步骤如下

1、样本采集：从体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2、DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3、PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4、PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5、结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在新港沙门氏菌的感染。

三、应用

新港沙门氏菌PCR试剂盒可以用于沙门氏菌荧光PCR快速检测方法的建立与应用：

研究采用分子信标技术和TaqMan-MGB技术，建立了两种针对沙门氏菌的新港沙门氏菌PCR试剂盒特异性荧光PCR检测方法，并初步运用于临床诊断和食品污染调查。

实验结果如下：

1、新港沙门氏菌PCR试剂盒沙门氏菌荧光PCR检测体系的建立(1)研究6种增菌液对荧光PCR反应的影响，选择SC(亚硒酸盐胱氨酸)增菌液为最佳培养沙门氏菌的增菌液。建立快速简便的样品前处理方法。(2)根据沙门氏菌属特异性基因invA设计了四对引物，并和Rahn设计的引物同时检测大量沙门氏菌及非沙门氏菌菌株，选用了其中一对特异性最强的新引物。(3)在这对引物间选择一段寡核苷酸序列，两端分别用FAM和MGB标记，优化反应条件，建立沙门氏菌TaqMan-MGB检测方法。(4)在这对引物问选择另一段寡核苷酸序列，两端各加上6bp互补的寡核苷酸形成分子信标，优化反应条件，建立沙门氏菌分子信标检测方法。

2、沙门氏菌荧光PCR检测体系的评价(1)特异性：用这两种新港沙门氏菌PCR试剂盒荧光PCR方法分别检测200株沙门氏菌属菌株，均呈阳性；检测200株非沙门氏菌属菌株，均呈阴性。(2)灵敏度：以鼠伤寒沙门氏菌为实验菌株(40循环)。对于DNA抽提物，TaqMan-MGB方法的检出限为69fg／PCR体系，分子信标方法的检出限为346fg／PCR体系；对于菌液，TaqMan-MGB方法和分子信标方法的检出限均为2cfu／PCR体系；对于食品样品，TaqMan-MGB方法和分子信标方法的检出限均为2cfu／25g样品。(3)抗干扰性：反应不受其他杂菌的干扰，食品样品经处理后对反应无影响。(4)重复性：平行实验的结果一致性高，可重复性强。

3、新港沙门氏菌PCR试剂盒沙门氏菌荧光PCR检测体系的应用(1)对深圳市肉菜市场的生肉、熟食进行抽查，200份生肉样品中，荧光PCR方法和传统方法均为阳性的为32份，荧光PCR阳性而传统方法阴性的为33份。(2)对食品从业人员的肛拭子调查中，300份样品用荧光PCR方法和传统方法均有3份检出阳性，符合率100%。(3)细菌性食物中毒的快速诊断:45份样品用荧光PCR方法和传统方法均检出28份沙门氏菌阳性，符合率100%。

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