小鼠脑微血管内皮细胞株的特点与应用及培养操作！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/03/28 16:24

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小鼠脑微血管内皮细胞株的特点与应用及培养操作！

一、背景

小鼠脑微血管内皮细胞株是一种用于实验研究的细胞系，来源于小鼠的脑微血管内皮细胞。这些细胞通常被用于研究脑微血管的功能和疾病，以及进行药物筛选和实验验证等。

小鼠脑微血管内皮细胞株的获取和培养需要一定的技术和设备支持，建议在专业的实验室或科研机构进行。同时，由于这些细胞系具有一定的特殊性和差异性，其使用和实验结果也需要根据具体情况进行评估和分析。

鼠脑微血管内皮细胞株是一种来源于小鼠脑部微血管内皮细胞的细胞系。这些细胞通常在体外培养条件下生长和繁殖，并可以用于研究脑血管疾病的发生机制、药物筛选和治疗等。

二、小鼠脑微血管内皮细胞株具有以下特点

形态特征：小鼠脑微血管内皮细胞株呈多边形或长方形，大小不一，通常有较多的突起和伪足。

生长特性：小鼠脑微血管内皮细胞株生长迅速，可以在体外培养条件下持续传代。

耐药性：小鼠脑微血管内皮细胞株对多种化疗药物具有耐药性，这使得它成为研究脑血管疾病耐药性的重要工具。

应用前景：小鼠脑微血管内皮细胞株在脑血管疾病的诊断、治疗和预防方面具有广阔的应用前景。

三、小鼠脑微血管内皮细胞株培养操作

1)复苏小鼠脑微血管内皮细胞株：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)小鼠脑微血管内皮细胞株传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)小鼠脑微血管内皮细胞株冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、应用

小鼠脑微血管内皮细胞株可以用于小鼠神经细胞中CBS催化生成的H2S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的影响及与VEGFR2的关系：

在体外观察了神经元CBS催化产生的H2S对小鼠脑微血管内皮细胞株的增殖、迁移和形成血管的影响,并初步探讨了其作用与VEGFR2的关系。

目的：

1、观察H2S对小鼠脑微血管内皮细胞株增殖迁移的作用。

2、探讨VEGFR2与H2S促进小鼠脑微血管内皮细胞株增殖迁移作用的关系。

3、探讨细胞内游离Ca2+浓度与H2S促进内皮细胞增殖迁移作用的关系。

4、观察H2S对内皮细胞血管生成的影响。

方法：

1、进行三种细胞株的传代培养,利用Transwell系统将小鼠海马神经细胞(HT22细胞)与小鼠脑微血管内皮细胞株(b End.3细胞)进行共培养。

2、采用siRNA小干扰技术,建立细胞转染模型。

3、CCK-8法检测小鼠脑微血管内皮细胞株的增殖。

4、细胞划痕法和Transwell法检测小鼠脑微血管内皮细胞株的迁移。

5、甲基蓝法检测共培养体系内H2S的含量。

6、钙荧光成像法检测小鼠脑微血管内皮细胞株胞内游离Ca2+浓度。7.血管生成实验检测H2S对内皮细胞成管能力的影响。

实验结果：

1、CCK-8实验结果表明与溶媒对照组比较,加入H2S供体Na HS(1×10-8～1×10-3.5 M)培养24 h时,小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞增殖有明显的增强(P<0.01)。VEGF164(10 ng/m L)有类似的增强作用(P<0.01)。结果表明外源性H2S对小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞的增殖有明显的促进作用。与溶媒对照组相比,加入1×10-3.5 M Na HS 1 h时,b End.3细胞和HUVEC细胞的增殖作用不明显,但在6 h时的增殖作用开始增强(P<0.01),并且在48 h时,Na HS增殖作用进一步增加(P<0.01)。在b End.3细胞和HUVEC细胞中分别加入VEGFR2阻断剂SU5416 10μM培养24 h对这两种细胞的增殖均无明显的影响,但可显著地抑制1×10-3.5 M Na HS引起的b End.3细胞和HUVEC细胞的增殖(P<0.01),提示外源性H2S促进小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞增殖作用可能与VEGFR2有关。

2、细胞划痕实验中,与溶媒对照组相比,Na HS(1×10-6～1×10-3.5 M)加入24 h可明显并呈浓度依赖性地增加小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移面积(P<0.01);Transwell实验结果表明与溶媒对照组相比,加入Na HS 1×10-3.5 M 24 h可明显地增加b End.3细胞和HUVEC细胞从Transwell上室膜内迁移到膜外的细胞数(P<0.01)。10 ng/m L VEGF164对小鼠脑微血管内皮细胞株b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移面积和迁移细胞数有类似的作用(P<0.01)。结果表明外源性H2S可明显地促进小鼠脑微血管及人脐静脉内皮细胞的迁移。SU5416单独加入24 h对b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移细胞数无明显的影响,但可显著地减少1×10-3.5 M Na HS或10 ng/m L VEGF164引起的b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移细胞数的增加(P<0.01),提示外源性H2S促进小鼠脑微血管及人脐静脉内皮细胞的迁移可能与VEGFR2有关。

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