甲基杆菌属的培养特性与保存方法及注意事项！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/04/09 16:47

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甲基杆菌属的培养特性与保存方法及注意事项！

甲基杆菌属，一属兼有甲基营养和甲烷营养特性的G-杆菌，也可用葡萄糖或其他复杂营养物作碳源和能源。

一、产品信息

平台编号：Bio-134555

规格：冻干物

拉丁属名： Methylobacterium Sp.

中文名称：甲基杆菌属

拉丁名称：Methylobacterium sp.

模式菌株：是

来源历史：←石河子大学生命科学学院

收藏时间：2020/7/9

原始编号：CLZ

原产国：中国

特征特性：菌落粉红色表面光滑，革兰氏染色阴性，短杆状细菌，30×50μm。(G+C)mol 68.5%，全基因组完成图(GenBank: CP047608)，16S rDNA (GenBank: MN795902)。

参考用途：可以生产吡咯喹啉醌、辅酶Q10、类胡萝卜素。

生物危害程度：四类

致病对象：无

分离基物：土壤

采集地：中国山东省德州市陵城

培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)

培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。推荐使用商品化成品培养基。

培养温度：30 ℃

需氧类型：好氧

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、知识简介

甲基杆菌属拉丁学名(Methylobacterium Green&Bousfield，1983) 杆状，0.8～1.0μm×1.0～8.0μm。单个或罕见成簇，也罕见分枝或多形态。以单极毛、亚极毛或侧生鞭毛运动，有的菌没有强烈的运动。细胞常含有大的嗜苏丹颗粒，有时有异染粒。细胞革兰氏阴性，有的菌株为革兰氏染色可变，代表菌株具有革兰氏阴性细胞多层细胞壁结构和柠檬酸盐合成特性。

三、培养特性

多数菌株生长缓慢，有的不能在营养琼脂上生长；在甘油-蛋白胨琼脂上的菌落直径为1～3mm。浅粉到亮橙红色。在甲醇-无机盐琼脂上菌落为更均一的浅粉色。色素是非水溶性，可能是类胡萝卜素。在液体培养基中会形成粉色表面菌环或菌膜。严格好氧，氧化酶和接触酶(常弱)阳性。化能异养菌，兼性甲基营养菌和罕有兼性甲烷营养菌。有的菌株可利用甲烷作为惟一碳、能源，但如在无机培养基上不能维持甲烷环境，该特性很易丧失。有报道代表菌株能消化C1化合物和同型柠檬酸途径(icl-途径)。当在复杂的有机培养基上有完整的三羧酸循环。该属成员分离于土壤、尘土、淡水、湖泥、叶表、瘤、稻谷和医院环境。最适温度25～30℃，包括8个种。能以一个碳为惟一碳源的革兰氏阴性好氧菌还有10个属。模式种：嗜有机甲基杆菌

四、保存方法

1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。

2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。

3、悬液保存法：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。

5、常用的冷冻保存法：

① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。

② 干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。

③ 液氮保存法(-196℃)：是适用范围最广的微生物保存法。

五、注意事项

1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；

2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

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