微生物基础知识:几种较常见的表面取样技术!
①拭子法
进行定量检测时,必须先用灭菌取样框(塑料或不锈钢等)确定被测试的区域。
棉花-羊毛拭子:用干燥的棉花-羊毛缠在长4cm,直径1cm~1.5cm的木棒或不锈钢丝上做成棉花-羊毛拭子。然后将拭子放在试管中,盖上盖子后灭菌。取样时先将拭子在稀释液中浸湿,然后在待测样品的表面缓慢旋转拭子平行用力涂抹两次。涂抹的过程中应保证拭子在取样框内。取样后拭子重新放回装有10ml取样溶液的试管中。
藻酸盐棉拭子:由海藻酸钙羊毛制成。将海造酸盐羊毛缠在直径为1.5mm的木棒上做成长1cm~1.5cm、直径7mm的拭子头,灭菌后放入试管中。取样步骤同①。取样后放入装有10ml的1+4Ringer氏溶液(含1%偏磷酸六纳)的试管中。
②淋洗法
用10倍于样品的灭菌稀释液(质量比)对样品进行淋洗,得到1:10的样品原液,这种取样方法可适用于全禽、干果、蔬菜等食品。报告结果时,应注明该结果仅代表样品表面的细菌总数。
③胶带法
这种取样方法要用到不干胶带或不干胶标签。不干胶标签的优点是能把取样的详细情况写在标签的背面,取样后贴在粘贴架上。不干胶胶带取样后同样需转接到一个无菌粘贴架上。这种方法可用于检测食品表面和仪器、设备表面的微生物。胶带和标签制成后,可用易挥发溶液进行短时间的灭菌。必须确保灭菌后的胶带无菌或残留的微生物失去活性。
胶带或标签的一端要向内弯回大约1cm左右以方便使用。取样时,把胶带从粘贴架上取下压在待测物质表面,迅速取样后,重新粘回到模板上。送到实验室后,将胶带(或标签)从粘贴架上取下,压在所需培养基表面。
④琼脂肠法
琼脂肠有无菌圆塑料袋(或塑料筒)和加入其中的无菌琼脂培养基制成。可在实验室制作,一些国家也有成品出售。使用时,在琼脂的末端无菌切开,将暴露的琼脂面压在样品表面,用无菌解剖刀切下一薄片,放在培养皿上培养。
⑤影印盘
影印盘是一种无菌的塑料盘,也可称为“触盘”,可以从许多生产厂商处买到。制作时按要求在容器中央填满足够的琼脂培养基,并形成凸状面,需要时,将琼脂表面压在待测物表面。取样后再放入适当的温度培养。
⑥触片法
用一个无菌玻片触压食品表面,带回实验室。固定染色(如革兰氏法)后在显微镜下检测,也可以将取样的玻片压在倒有培养基的平板上,将细菌转接到琼脂表面,(用无菌镊子)移去玻片后,培养平板。这种方法不能用于菌体计数,但能快速判断优势菌落的类型,这对生肉、禽肉和软奶酪等食品更为适用。
⑦表层切片法
用灭菌解剖刀或镊子切取一薄层表层样品。这种方法最适用于家禽皮肤的取样。将样品放入装有适当稀释液和适当稀释度的容器中,均质后得到初始浓度为10-1的样品原液。
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