AtT20(小鼠垂体瘤细胞)的培养操作及应用!
一、背景
AtT20是一种来源于小鼠垂体腺瘤的细胞系,常用于研究垂体腺瘤的生物学特性、药物筛选和治疗策略。该细胞系具有以下特点:
来源:AtT20细胞系来源于小鼠垂体腺瘤组织,经过多次传代和筛选,形成了一个相对稳定的细胞系。
形态特征:AtT20细胞呈多边形或长条形,大小约为15-30微米,胞质丰富,核大而圆,核仁明显。
生长特性:AtT20细胞生长迅速,传代周期约为24-48小时,可在含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中稳定生长。
激素分泌特性:AtT20细胞具有垂体腺瘤的典型激素分泌特性,如生长激素、促甲状腺激素等,可用于研究垂体腺瘤相关的激素分泌异常。
其他特性:AtT20细胞还具有一定的增殖能力,可用作研究垂体腺瘤细胞增殖相关疾病的模型。
二、AtT20细胞系培养操作
1)复苏AtT20细胞系:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)AtT20细胞系传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)AtT20细胞系冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
AtT20可以用于丙戊酸钠联合替莫唑胺对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1凋亡的促进作用及其机制研究:
探讨替莫唑胺联合丙戊酸钠对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1增殖的抑制作用以及凋亡的促进作用,并探讨其可能的分子机制。
方法:
1、细胞培养:小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM/High Glucose培养基中,放置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养,视细胞生长状态,间隔约1-2天半量换液一次,3天左右1:3传代一次。取对数生长期的细胞进行实验。
2、TMZ与VPA对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,将细胞分为(1)AtT20细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mM)TMZ,并分别培养24、48、72h;(2)AtT20细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度(2、4、8、16、32、64mM)VPA,并分别培养24、48、72h;(3)GT1-1细胞TMZ组:向细胞中分别加入不同浓度TMZ(浓度同前),并分别培养24、48、72h;(4)GT1-1细胞VPA组:向细胞中分别加入不同浓度VPA(浓度同前),并分别培养24、48、72h,通过CCK-8法检测TMZ与VPA各自对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。
3、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞活性的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,将细胞分为(1)对照组(加入等量完全培养基);(2)TMZ组(加入1.6mMTMZ);(3)VPA组(加入16mMVPA);(4)TMZ+VPA组(加入1.6mM TMZ以及加入16mM VPA)。药物处理72h后,通过LDH法检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞活性的影响。
4、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基、TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过TUNEL染色、流式细胞计数检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响;通过Hoechst 33258染色检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞形态学的影响。
5、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡影响的分子机制。取对数生长期的AtT20、GT1-1细胞,按照上述分组,分别给予完全培养基、TMZ以及VPA,药物处理72h后,通过Western blot检测TMZ与VPA联合应用对AtT20、GT1-1细胞cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2、AIF、cleaved PARP、p53等凋亡相关蛋白表达水平的影响。
结果:
1、TMZ与VPA对AtT20、GT1-1细胞增殖的影响。CCK-8法检测结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞增殖与对照组相比明显抑制且具有统计学意义(p<0.05),TMZ、VPA对细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性与时间依赖性。
2、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞活性的影响。LDH法检测结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞活性与对照组相比明显降低且具有统计学意义(p<0.05),TMZ与VPA联合应用后细胞活性进一步降低,结果具有统计学意义(p<0.05)。
3、TMZ与VPA联合应用对小鼠垂体腺瘤细胞AtT20、GT1-1细胞凋亡的影响。TUNEL染色、流式细胞计数结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,细胞凋亡水平与对照组相比显著升高,结果具有统计学意义(p<0.05)TMZ与VPA联合应用后细胞凋亡水平进一步升高,结果具有统计学意义(p<0.05)。Hoechst 33258染色结果显示:TMZ、VPA分别作用于AtT20、GT1-1细胞后,表现为均匀弥散染色的细胞核(活细胞核)数量减少,浓染致密的颗粒块状荧光(凋亡细胞核)数量增多,细胞凋亡水平与对照组相比显著升高,TMZ与VPA联合应用后凋亡水平进一步升高。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
实验室管理之临床基因扩增检验实验室基本设置标准!
糠秕马拉色菌糠秕孢子菌:主要用于生物医学研究
人肝窦状小管内皮细胞收到后的处理方法与培养步骤!
苜蓿疫霉的培养方法与注意事项及冻干管打管说明!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Apophysomyces Elegans
Umbelopsis Nana
Benjaminiella Poitrasii
Piptocephalis Debaryana
Mortierella Amoeboidea
Pelobacter acidigallici
Cystobacter fuscus
Thermococcus peptonophilus
Halorubrum coriense
Thermococcus chitonophagus
Picrophilus oshimae
Halorubrum vacuolatum
Methanosarcina sp
关注
拨打电话
留言咨询