Lec1(仓鼠卵巢细胞)的应用及培养操作步骤!
一、背景
Lec1(仓鼠卵巢细胞)是一种特殊的细胞系,具有上皮细胞的形态,并且适应贴壁生长。这种细胞是从脯氨酸缺陷型的CHO(中国仓鼠卵巢)克隆Pro-5中挑选出来的能抗麦芽凝集素的突变株。由于Lec1缺乏称为GlcNAc-T1的糖基转移酶,因此N-连接的碳水化合物被阻断在Man5GlcNAc2Asn中间体。这一特性使得Lec1细胞在研究N-连接糖基化改变对内源糖蛋白或病毒感染、以克隆DNA转染产生的糖蛋白的功能和区隔化的影响方面非常有用。
在细胞培养方面,Lec1(仓鼠卵巢细胞)通常需要在特定的培养体系和条件下进行传代和培养。例如,它们可以在MEMα培养基中添加10%的FBS(胎牛血清)和1%的P/S(青霉素/链霉素)进行培养。对于传代,一般采用1:2的比例进行传代。此外,这些细胞也可以进行冻存和复苏,但需要使用适当的冻存条件和保存液,以确保细胞的活力和稳定性。
Lec1(仓鼠卵巢细胞)是一种重要的科研工具,特别适用于研究N-连接糖基化对细胞功能和病毒感染等方面的影响。通过使用这种细胞系,科学家们可以深入了解糖基化过程在生物体内的复杂作用,并为相关疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
二、Lec1(仓鼠卵巢细胞)培养操作
1)复苏Lec1(仓鼠卵巢细胞):以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)Lec1(仓鼠卵巢细胞)传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)Lec1(仓鼠卵巢细胞)冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
Lec1(仓鼠卵巢细胞)可以用于金雀异黄素联合阿霉素对卵巢癌A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用研究:
探讨金雀异黄素(genistein GEN)联合阿霉素(adriamycin ADR)对卵巢癌(Ovarian cancer)A2780细胞增殖和荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及其机制。
方法:把卵巢癌A2780细胞和Lec1(仓鼠卵巢细胞)制成细胞悬液后,接种于SD品系裸鼠右后肢跟部皮下,制成卵巢癌裸鼠模型。实验分成4组进行:生理盐水组(裸鼠腹腔注射生理盐水0.2ml),金雀异黄素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg),阿霉素组(裸鼠腹腔注射ADR 20mg/m2),金雀异黄素联合阿霉素组(裸鼠腹腔注射c-myc GEN30mg/kg联合ADR 20mg/m2)。4周后处死裸鼠,剥取完整的肿瘤组织称重,并计算各组肿瘤抑制率。免疫组织化学方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达,免疫蛋白印记方法检测c-myc在肿瘤细胞中的表达量,四甲基噻唑蓝(Methy thiazoly1 tetrazolium,MTT)检测各组细胞的增殖能力,细胞黏附实验、细胞迁移(transwell)实验检测各组细胞的侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。
结果:肿瘤抑制率结果分析,与生理盐水组相比,金雀异黄素联合阿霉素治疗组、阿霉素组、金雀异黄素组,抑瘤率分别为(44.81±5.74)%,(38.45±4.25)%、(32.26±2.21)%差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果金雀异黄素联合阿霉素组、阿霉素组、金雀异黄素组均对c-myc表达,Western Blot检测显示与生理盐水组相比,联合治疗组、阿霉素组、金雀异黄素组c-myc表达量明显上调(P<0.05)。MTT方法检测显示空白对照组、GEN组、ADR组、GEN和ADR组,细胞活力分别为(100.0±0.0)%,(56.4±4.25)%、(59.26±2.21)%、(40.33±1.23)%。细胞粘附力检测GEN联合ADR组、ADR组、GEN组可降低A2780细胞的粘附力(P<0.05),而对Lec1(仓鼠卵巢细胞)细胞无影响。细胞迁移力实验检测显示GEN联合ADR组、ADR组、GEN组,细胞迁移率明显低于空白对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测显示GEN联合ADR组、ADR组、GEN组,G0/G1期细胞数明显升高(P<0.05),S期细胞数明显降低(P<0.05),GEN联合ADR组、ADR组、GEN组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.05),且对Lec1(仓鼠卵巢细胞)细胞无促进细胞凋亡作用。
结论:
1、GEN联合ADR可抑制裸鼠体内卵巢癌细胞及抑制体外卵巢A2780细胞的增殖、细胞的侵袭能力,促进肿瘤细胞的凋亡,但对Lec1(仓鼠卵巢细胞)无效。
2、GEN联合ADR抑制卵巢癌A2780细胞的增殖、侵袭能力,促进细胞凋亡其机制为降低肿瘤细胞对c-myc的表达,影响c-myc蛋白参与调控的癌细胞增殖和转移过程。
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