小鼠膀胱癌细胞的特点与应用及培养操作规程!
一、背景
小鼠膀胱癌细胞是指在小鼠体内培育出的膀胱癌细胞系。这些细胞系通常来自于小鼠的膀胱组织,经过一系列的实验室操作,如分离、培养和传代,最终形成稳定的细胞系。
二、小鼠膀胱癌细胞系具有以下特点
形态特征:小鼠膀胱癌细胞通常呈多角形或长条形,大小不一,有明显的核仁和胞质。
生长特性:小鼠膀胱癌细胞具有较强的增殖能力,可以在体外持续传代,并且可以在体内形成肿瘤。
基因表达:小鼠膀胱癌细胞系通常表达多种与膀胱癌相关的基因,如VEGF、EGFR等。
小鼠膀胱癌细胞系在生物学研究中具有广泛的应用价值,例如用于研究肿瘤发生和发展的机制、筛选抗肿瘤药物、评估治疗效果等。同时,由于小鼠与人类在生理和病理方面存在一定的相似性,因此小鼠膀胱癌细胞系也被广泛应用于人类肿瘤的研究中。
三、小鼠膀胱癌细胞培养操作
1)复苏小鼠膀胱癌细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)小鼠膀胱癌细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)小鼠膀胱癌细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
四、应用
小鼠膀胱癌细胞可以用于猪苓多糖通过诱导自噬抗膀胱癌研究:
研究均一猪苓多糖(homogeneous polyporus polysaccharide,HPP)对膀胱癌细胞自噬的影响,探讨HPP通过调节自噬抗膀胱癌的作用机制,为膀胱癌治疗提供实验数据。
方法:建立BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,成瘤后将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照吉西他滨(Gemcitabine,Gem)组、HPP低/中/高剂量组,分别给予对应药物腹腔注射。给药期间,每天观察小鼠生命体征等情况,每隔一天称体重,并用游标卡尺测量肿瘤最大径(a)及最小径(b),计算肿瘤体积。给药结束后,取小鼠肿瘤拍照、称重。并采用Western blot检测肿瘤组织中自噬及其相关蛋白Beclin1及p62的表达。
建立模拟体外肿瘤微环境的RAW264.7与小鼠膀胱癌细胞(小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞))共培养模型,将其分为对照组及HPP低、中、高剂量组。共培养24h后,采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)实验检测HPP对小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)增殖能力的影响。
采用单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光染色实验检测细胞质中自噬体的形成,并采用Western blot检测自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62、LC3BⅡ的表达。再采用Western blot检测自噬上游信号通路PI3K/Akt/mTOR蛋白的表达。然后,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA),检测细胞质中自噬体形成的变化、自噬标志蛋白LC3BⅡ表达的变化,及小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)增殖能力的变化。
采用Western blot检测小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)在单独培养与共培养细胞模型中自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62的表达情况,并检测HPP单独作用对小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62表达的影响。
结果:体内实验结果:
1、与阴性对照组相比,Gem组小鼠体重明显下降(P<0.05),小鼠肿瘤体积和重量无明显变化(P>0.05)。
2、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠体重均呈增加的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与Gem组相比,HPP各浓度组小鼠体重显著增加(P<0.05)。
3、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠肿瘤体积无明显变化(P>0.05),肿瘤重量呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。
4、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠肿瘤组织中Beclin1蛋白表达升高(P<0.05),p62蛋白表达降低(P<0.05)。
体外实验结果:
1、在共培养细胞模型中,与对照组相比,HPP能抑制小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)的增殖能力(P<0.05),诱导小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)发生自噬,表现为细胞质中自噬体形成增多,且细胞中p62蛋白表达减少(P<0.05),SirT1、Beclin1、LC3BⅡ蛋白表达升高(P<0.05)。同时,经HPP处理后,与对照组相比,小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)中PI3K/Akt/mTOR信号通路总蛋白及磷酸化蛋白的表达均降低(P<0.05)。加入3-MA后,与HPP组相比,细胞质中自噬体形成减少,LC3BⅡ蛋白表达降低(P<0.05),HPP诱导的自噬被抑制,且HPP对小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)增殖抑制的效应减弱(P<0.05)。
2、与单独培养相比,小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)在共培养细胞模型中自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62的表达无明显变化(P>0.05)。
3、与空白组相比,HPP单独处理后,小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)中SirT1、p62蛋白的表达无明显变化(P>0.05),Beclin1蛋白的表达呈上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
生鲜乳微生物超标的原因及其控制与预防策略!
干细胞:生命科学领域的一颗璀璨明珠,默默守护着我们的健康!
生物改造技术与生物资源利用大会在未来科学城成功举办!
白色拟诺卡氏菌的微生物培养方法与实验操作步骤!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Halostagnicola larsenii
Sulfurisphaera tokodaii
Aeropyrum camini
Haloquadratum walsbyi
Desulfurococcus amylolyticus
Halobacterium noricense
Caldisphaera lagunensis
Natrinema pallidum
Saccharococcus thermophilus
西伯利亚库特氏菌 Kurthia sibirica
Clostridioides difficile
Clostridiisalibacter paucivorans
Cloacibacillus evryensis
关注
拨打电话
留言咨询