HCT-15细胞专用培养基的培养操作及其应用!
一、背景
HCT-15细胞专用培养基可保持HCT-15细胞的生长状态。培养基中已包含HCT-15细胞生长所需的各种成分,无需添加任何成分,可直接用于HCT-15细胞的体外培养。
二、细胞培养操作
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类;
1、细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
用于水蜡树果实提取物对结肠癌HCT-15细胞的增殖、千移及凋亡诱导因子AIF表达的影响研究:
通过体外实验研究水蜡树果实提取物(Fruit of Ligustrum Obtusifolium Extract,FLOE)对结肠癌HCT-15细胞的增殖、迁移及凋亡诱导因子(Apoptosisi Iducing Fctor,AIF)表达的影响,探讨其可能的作用机制,为中药在结肠癌治疗中的研发及AIF应用于结肠癌治疗提供更多的理论依据。
方法:体外培养结肠癌细胞株HCT-15,取对数期细胞用于实验。将FLOE用不完全培养基RPMI-1640稀释成不同浓度:0μg/ml(对照组)、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml组,并用RPMI-1640不完全培养基稀释75%酒精(20μg/ml),设置阴性对照。
采用普通光学显微镜观察在不同浓度药物分别处理24h、48h、72h、96h后细胞形态学变化,并在显微镜下计算贴壁细胞数量。采用MTS法检测不同浓度药物分别处理24h、48h、72h、96h后,对HCT-15细胞存活率的影响。采用集落实验检测不同浓度FLOE对结肠癌HCT-15细胞生存能力的影响;划痕实验检测在不同浓度药物处理后,对HCT-15细胞迁移能力的影响。
采用Western bolt法检测在不同浓度药物作用48h后,对HC15细胞凋亡相关蛋白及AIF表达的影响。结果:随着FLOE药物浓度的增高及作用时间的延长,HCT-15细胞伸展变差、细胞间隙增大、空泡化、细胞漂浮,细胞计数发现贴壁细胞也随之减少。MTS结果表明与对照组相比FLOE处理后的细胞存活率降低(P<0.05),且呈时间及浓度依赖性。
划痕实验结果表明与对照组相比FLOE处理后的细胞划痕区域相对宽度较宽(P<0.05)。集落实验结果表明FLOE处理后细胞集落形成数量明显降低,与对照组相比集落抑制率有统计学意义(P<0.05)。Western bolt实验结果表明随着FLOE浓度的增高,Survivin、Mcl-1蛋白表达水平明显降低,而凋亡诱导因子AIF表达增加。
结论:水蜡树果实提取物能抑制HCT-15细胞增殖及迁移,且呈浓度及时间依赖性。其机制可能通过下调抗凋亡蛋白的表达及上调凋亡诱导因子AIF的表达实现。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务,对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位,都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务!也正因为此,北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系!
小鼠肾小管平滑肌细胞试剂盒的知识与应用研究!
食物中真菌毒素的危害及检测与预防方法有哪些?
红酵母属的培养条件与生理特性及分布范围与影响能力!
无血清培养基的特点与分类及应用领域与使用说明!
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Natrinema sp
Sulfuracidifex metallicus
Stygiolobus azoricus
Haloarcula japonica
Saccharolobus solfataricus
Haloferax volcanii
Methanotorris igneus
Archaeoglobus profundus
Haloterrigena turkmenica
Thermococcus litoralis
Roseovarius lutimaris
Roseovarius tolerans
Rossellomorea aquimaris
关注
拨打电话
留言咨询