大鼠肺大静脉平滑肌细胞的性质与用途及生产工艺!
一、背景及概述
平滑肌细胞又叫平滑肌纤维,系构成平滑肌的纤维状长细胞。由于平滑肌所分布的部位不同,平滑肌细胞的长度很不一致,在小血管壁上的平滑肌细胞长度仅有20μm左右,妊娠期子宫壁平滑肌细胞可长达500μm,位于一般器官平滑肌细胞的长度约200μm左右,此细胞的宽度在7μm以内。
平滑肌细胞多聚集成束,细胞轮廓不清,需用适当浓度的酸(碱)溶液将其分离,方可获得外形完整的肌细胞。细胞内只有1个细胞核,呈椭圆形或长杆状,位于细胞中段最宽的部分,长度与纵轴平行,核染色质为纤细网状,可见2个以上核仁。
在制作切片标本时,如肌细胞收缩则可变粗,核也随之变粗,甚至可出现螺旋形的扭曲。平滑肌细胞的胞质通常称为肌浆。生活状态下的胞质呈均质性,一般染色切片上不显任何结构。应用特殊染色或用三氯醋酸溶液稍加浸泡,可在胞质内显出纵列的细丝,称肌原纤维。
平滑肌细胞外面包有1层肌膜。每个平滑肌细胞周围有少量纤细的胶质纤维、弹力纤维及网状纤维,包绕于肌膜的表面。平滑肌细胞可随环境的改变伸长或缩短,有很大的弹性和韧力。
大鼠肺大静脉平滑肌细胞分离自肺大静脉组织;肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中,把动脉血由肺送回心脏的静脉,是一个静脉里流动脉血的血管。左右1对,共4条,两条连接右肺,两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接,而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位。
肺静脉淤血性肺动脉高压,是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下,肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点,肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力,要维持肺循环的低压、低阻的状态,必须保证整个肺循环系统的畅通无阻,血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉,再入左心室,经过左心室收缩进入体循环,才能避免肺动脉内压力升高。
二、细胞培养
大鼠肺大静脉平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。该细胞参与血管壁炎症反应,保持静脉管腔的通畅,还是多数动脉疾病的靶细胞。
大鼠肺大静脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10^5cells/瓶;细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
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