小鼠肺成纤维细胞的知识与应用及培养操作步骤!
一、背景
小鼠肺成纤维细胞是肺间质中数量最多的细胞类型之一。这些细胞与普通的成纤维细胞相似,但具有一些独特的特征,例如它们有很长的分枝过程及间隙连接。
小鼠肺成纤维细胞主要来源于肺组织,肺是机体的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆盖于心之上。肺有分叶,左二右三,共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连,故称喉为肺之门户,鼻为肺之外窍。
成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。它们较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。这些细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动。在一定条件下,成纤维细胞可以实现跟纤维细胞的互相转化。
小鼠肺成纤维细胞的主要功能为分泌肺泡隔基质中的III型胶原、弹性蛋白以及蛋白多糖,也在肺部受损时担任重要的修复和重建功能。肺部受伤后,在炎症部位的一定程度的成纤维细胞积聚是肺部复原的关键步骤,过多或者不足的成纤维细胞聚集都会导致肺功能异常。
小鼠肺成纤维细胞是一种在肺组织中发挥重要作用的细胞类型。它们属于肺泡间质细胞,主要负责产生和维护肺泡的结构完整性,参与肺组织的修复和再生过程。
在正常情况下,肺成纤维细胞处于静息状态,不参与免疫反应。然而,在某些病理条件下(如肺部感染、炎症、损伤或纤维化),肺成纤维细胞会被激活并增殖,产生大量的胶原蛋白和其他细胞外基质组分,导致肺组织的纤维化和功能受损。
二、小鼠肺成纤维细胞培养操作
1)复苏小鼠肺成纤维细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)小鼠肺成纤维细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,弃去消化液,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基,轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心4 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3)小鼠肺成纤维细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、应用
小鼠肺成纤维细胞可以用于麦味养肺汤通过p53抑制肺成纤维细胞衰老抗肺纤维化的机制研究:
MWYF在体内和体外抑制肺成纤维细胞衰老的研究:
①体内:通过衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal)染色观察小鼠肺组织衰老情况,利用Western Blot检测衰老相关蛋白p53、p21和p16在小鼠肺组织中的表达情况,通过免疫荧光观察肺组织中成纤维细胞标志物α-SMA与衰老相关蛋白p53、p21和p16的共染情况。
②体外:提取小鼠肺成纤维细胞,利用免疫组化对提取的成纤维细胞进行鉴定,通过CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)确定MWYF冻干粉给药剂量。将原代肺成纤维细胞分为空白组,模型组,MWYF低剂量组(400μg/mL),MWYF中剂量组(600μg/mL)和MWYF高剂量组(800μg/mL)。利用阿霉素(Doxorubicin,DOX)干预48 h建立细胞衰老模型,分别用含不同浓度MWYF冻干粉的培养基干预24h,通过SA-β-Gal染色观察肺成纤维细胞衰老情况,利用Western Blot检测衰老相关蛋白p53、p21、p16和衰老相关分泌因子(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)在小鼠肺成纤维细胞中的表达情况。
MWYF在体内和体外抑制肺成纤维细胞衰老的研究:在小鼠体内,发现MWYF能够降低肺组织中SA-β-Gal活性,减少衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达水平,同时通过双荧光标记发现MWYF可以减少小鼠肺成纤维细胞衰老。在体外,发现MWYF能够降低肺成纤维细胞中SA-β-Gal活性,减少衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达水平,抑制SASP表达。体内和体外结果均显示MWYF高剂量组冻干粉效果最为明显。
MWYF通过p53抑制肺成纤维细胞衰老的研究:通过质粒载体对肺成纤维细胞实现p53基因沉默后发现,MWYF减少小鼠肺成纤维细胞衰老作用受到抑制,降低p21和p16蛋白表达能力受到抑制;通过质粒载体对肺成纤维细胞实现p53基因过表达后发现,MWYF减少肺成纤维细胞衰老作用未受抑制,降低p21和p16蛋白表达能力也未受到抑制。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!
解鸟氨酸柔武氏菌的培养方法与实验内容及注意事项!
斯氏芽孢杆菌:主要用于代谢产物测定和食品检测
食油假单胞菌的培养方法与操作流程及注意事项!
夏日炎炎,你知道奶茶制品微生物检验的项目有哪些吗?
相关产品
沙门氏菌生化鉴定试剂盒(GB)
安洁清4号实验室玻璃器皿专用洗涤剂
Mucor Hiemalis
Mucor Nederlandicus
Rhizopus Schipperae
Rhizopus Arrhizus Var. Delemar
Rhizopus Microsporus Var. Microsporus
Rhizopus Microsporus Var. Rhizopodiformis
乳酸乳球菌 Lactococcus lactis
Pelobacter sp.
阿波罗栖热袍菌 Thermotoga neapolitana
噬胺芽孢杆菌 Bacillus aminovorans
Anaerofilum agile
Annwoodia aquaesulis
海洋红嗜热菌 Rhodothermus marinus
关注
拨打电话
留言咨询