细菌和真菌基因组测序样品送样建议及其注意事项！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/08/15 16:19

细菌和真菌基因组测序样品送样建议及其注意事项！

1、微生物样品前期准备

对于高通量测序的微生物样品前期一定要注意取样的及时性以及低温性，样本质量是影响实验结果的最关键因素，因此用于研究的实验样本，在采集、贮存、运输和制备的过程中尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。且在所取样本离体后条件允许应应立即投入液氮中速冻至少1小时，之后保存于-80℃冰箱或者干冰中，确保在实验操作前样品始终处于-80℃，以避免DNA/RNA的降解。

2、真菌微生物取样建议（大型真菌）

A.从菌体上取下生长旺盛的组织，用无菌水冲洗干净，再使用75%乙醇冲洗，用吸水纸吸干样品表面；

B.如果组织体积较大，应尽量将组织剪切成长宽高均≤0.5cm的小块；

C.将处理好的组织样本保存于2mL或更大体积的旋盖冻存管中或者用准备好的锡箔纸包裹组织；

D.迅速置于液氮中冷冻1小时，然后转移至-80℃或液氮中长期保存；

E.运送方式：将样品管用封口膜封口，再放置于50mL离心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管内或其他支撑物内加入液氮等危险品），干冰运输。

3、丝状真菌取样建议（平板培养）

A.根据丝状真菌的生长周期，选取最活跃时期进行菌体收集；

B.无菌操作，将平板内真菌菌丝刮取于无菌的离心管内；

C.取样后立即将菌体于液氮中冷冻1h，然后转移至-80℃或液氮中长期保存；

D.运输方式：将样品管用封口膜封口，再放置于50mL离心管中或封口袋中，里面添加棉花等固定（切勿在50mL管内或其他支撑物内加入液氮等危险品），干冰运输。

4、细菌基因组取样建议

A.显微镜下观察细菌生长状态，收集对数期的细菌；

B.将适量体积菌液转移至2mL旋盖尖底离心管中，室温下14000×离心1min；

C.弃尽培养基，将细菌沉淀迅速置于液氮中冷冻1小时，然后转移至-80℃或液氮中长期保存；

5、注意事项划重点

Tip1：送样优先选择新鲜采集的样本；其次才是冻存样本；

Tip2：用于DNA样品制备实验的组织样品处理及切割过程应在冰上尽可能快速进行，时间过长会导致样品DNA降解，影响测序结果；

Tip3：反复冻融和长期保存的组织有更多的降解风险，所以应一次性准备好样品，避免组织或菌体反复冻融。

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