原代细胞人前列腺成纤维细胞的使用方法与注意事项！

北京百欧博伟生物技术有限公司

2024/09/23 15:23

原代细胞人前列腺成纤维细胞的使用方法与注意事项！

一、细胞简介

人前列腺成纤维细胞分离自前列腺组织；前列腺(Prostate)是雄性特有的性腺器官；前列腺是不成对的实质性器宫，由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子，底朝上，与膀胱相贴，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面贴耻骨联合，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口，所以，前列腺有问题时，排尿首先受影响。前列腺是机体非常少有的，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。

二、产品信息

平台编号：Bio-73482

规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

细胞名称：人前列腺成纤维细胞

培养条件：原代细胞取组织现分

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态最佳

传代比例：1:2

消化液：0.25%胰蛋白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、细胞特性

1)细胞来源于人正常前列腺组织。

2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、使用方法

人前列腺成纤维细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈纤维细胞样，在澳睿赛技术部标准操作流程下，细胞可传5代左右；3代以内状态最佳；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1、取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2、贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

3、细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4、细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

六、注意事项

1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2、在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3、传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4、建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和澳睿赛技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

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